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单环刺螠(Urechisunicinctus),螠虫动物门、螠纲、无管螠目、刺螠科,刺螠属。单环刺螆蛋白质含量高,内脏含有丰富的氨基酸、多糖及微量元素,具有很高的营养价值及药用价值。前期研究表明,单环刺螠糖胺聚糖(GAG)具有很好的抗凝血的作用。本文通过检测大鼠血小板环腺苷酸(cAMP)、血栓烷B2、6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1α)和血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)的浓度、分析血小板血管扩张刺激磷酸蛋白(VASP)、蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)表达及P2Y12受体mRNA的表达,探明单环刺螆糖胺聚糖对血小板P2Y12受体信号通路的影响。将SD大鼠随机分为对照组、糖胺聚糖组(8mg/kg)和阳性对照组(4mg/kg)。给药及制备富血小板血浆(PRP):尾静脉注射药物30 min后股动脉取血,3.8%枸橼酸钠抗凝,常规方法进行富血小板血浆(PRP)的制备(体内实验);直接采集大鼠血液,制备PRP(体外实验)。将PRP与ADP37 ℃孵育5 min后冰上急冷终止反应,4000 rpm离心10 min,上层贫血小板血浆用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血小板血栓素B2和6-酮-前列腺素;将下层血小板反复冻融裂解,离心后取上清,酶联免疫吸附法测定血小板环腺苷酸、膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲa;蛋白质印迹法测定血管扩张刺激磷酸蛋白磷酸化水平、蛋白激酶A磷酸化水平、血小板磷脂酰肌醇激酶和蛋白激酶B磷酸化水平;实时荧光定量PCR及RT-PCR检测GAG对血小板P2Y12受体表达的影响。结果表明:GAG能显著提高血小板cAMP浓度(P<0.01),显著降低血浆中的TXB2浓度(P<0.05),显著升高血浆中的6-keto-PGF1α浓度(P<0.01),显著促进PKA和VASP的磷酸化(P<0.05,P<0.01),显著降低血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲma复合物水平(P<0.05),抑制血小板P2Y12受体mRNA表达(P<0.01),对于PI3K及Akt蛋白磷酸化水平无显著影响(P>0.05)。单环刺螠糖胺聚糖和受体拮抗剂联用结果显示:GAG与P2Y12受体拮抗剂MRS2395具有协同作用。结论:GAG抑制血小板的聚集可能通过升高血小板P2Y12受体信号通路中cAMP浓度和6-keto-PGF1α浓度,降低TXB2浓度和膜糖蛋白IIb/IIIa复合物水平,促进PKA和VASP磷酸化水平来实现的。