银耳多糖提取纯化、结构特征及溶液性质研究

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以银耳子实体为原料,采用热水煮提、醇沉法提取银耳粗多糖,经酶-Sevage法去蛋白、DEAE-52纤维素离子交换层析和Sephacryl S-400凝胶过滤层析纯化后得到银耳均一多糖TFP1,用苯酚-硫酸法、间羟联苯-硫酸法检测其总糖、糖醛酸等组分的含量;PMP衍生化后反相高效液相色谱测单糖组成,结合红外光谱和核磁共振图谱分析银耳多糖一级结构特征;利用尺寸排阻色谱-激光光散射(SEC-LLS)、碘=碘化钾实验、刚果红实验、粘度检测和原子力显微镜技术对多糖溶液性质进行初步探讨。组分分析表明精制银耳多糖TFP1总糖含量为81.9%,糖醛酸含量为6.9%,不含蛋白质和核酸;单糖组成分析、红外光谱及核磁共振图谱结果表明TFP1主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖和岩藻糖四种单糖组成(含少量葡萄糖),其物质的量比约为5.78:0.7:1.1:1,TFP1是分子构型为α=型且含有O-乙酰基结构的酸性杂多糖。SEC-LLS检测计算出TFP1在NaCl溶液中的重均分子量(Mw)为5.832×106Da,多分散系数(Mw/Mn)为1.005,均方根旋转半径(<S2>z1/2)为191.3 nm,说明TFP1是分子量较大且糖链为刚性链的均一多糖。由Huggins方程和Kraemer方程计算的TFP1的特性粘度[η]=1508.3 mL/g,所以TFP1在25℃的0.1 mol/LNaCl溶液中具有较高的刚性,分子链较为伸展。碘-碘化钾实验中300-700 nm紫外-可见光吸收图谱中565 nm处没有最大吸收值,说明TFP1是具有多分支或支链的大分子。随着碱浓度升高,刚果红与银耳多糖形成的络合物最大吸收波长相应减小,但相对于刚果红本身最大吸收波长减少明显缓慢,说明其没有三螺旋结构。由于自身带电荷、分子内作用力和多支链等原因在原子力显微镜下观察到TFP1的形貌呈球状。综上,银耳多糖TFP1是以甘露糖为主链,主要由四种单糖残基(含少量葡萄糖)组成,含有O-乙酰基结构且具有多个分支的酸性均一杂多糖,分子构型为a-型。溶液性质研究表明TFP1是分子量较大且伸展的刚性链,不存在三螺旋结构。
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