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肌抑素(Myostatin)前肽可作为Myostatin成熟肽的抑制剂,促进家畜的肌肉生长,EB和CVN是一类具有广谱抗病毒作用的生物活性肽。在前期研究中,本实验室构建了猪肌抑素前肽与EB或CVN抗病毒肽融合表达载体(pcDNA3.1-MSTNpro-EB/CVN),并证实其具有促肌生长和抗PRRSV作用。有关Myostatin前肽促肌生长的作用机制已经比较明了,但EB和CVN抑制PRRSV的作用机制尚不清楚。因此,本试验以Marc-145细胞为体外模型,进一步研究EB和CVN抗病毒肽抵御PRRSV的分子机制,对研发新型的抗病毒基因工程药物提供理论依据。本试验分为正常细胞和经PRRSV处理细胞两种情况,每种情况又分别设计未转染组、pcDNA3.1 空载体组、pcDNA3.1-MSTNpro 组、pcDNA3.1-MSTNpro-EB 组和pcDNA3.1-MSTNpro-CVN组。通过Annexin V-EGFP和PI双染色法及荧光定量PCR从形态和mRNA水平上检测了猪肌抑素前肽-抗病毒肽的抗PRRSV作用及其对相关受体和细胞因子表达的影响。结果表明:①与转染空载体相比,MSTNpro、MSTNpro-EB和MSTNpro-CVN组的目的基因mRNA水平极显著升高,表明在Marc-145细胞实现了高效过表达。②与空载体组相比,MSTNpro-EB组和MSTNpro-CVN组细胞在PRRSV处理后存活率均显著升高,说明EB和CVN抗病毒肽均对PRRSV具有抑制作用。③对未转染细胞,PRRSV感染后比正常时CD163 mRNA表达显著下调,IL-6和TNF-α mRNA表达显著上调。④对于正常细胞,与空载体组相比,MSTNpro-EB组CD163和CD151 mRNA表达显著下调,MSTNpro-CVN组CD 163 mRNA表达显著下调;对于PRRSV处理细胞,与空载体组相比,MSTNpro-EB组CD163和CD151mRNA表达显著下调,MSTNpro-CVN组CD163 mRNA表达显著下调。⑤对于正常细胞,与空载体组相比,MSTNpro-EB组IL-6 mRNA表达显著上调,TNF-α mRNA表达显著下调;对于PRRSV处理细胞,与空载体组相比,MSTNpro-EB组IL-6 mRNA表达显著上调,TNF-α和HSPB1mRNA表达显著下调,MSTNpro-CVN组TNF-α和HSPB1mRNA表达显著下调。综合以上结果,表明:细胞本身可通过下调受体CD163 mRNA表达、上调免疫应答因子IL-6和TNF-α mRNA表达以对PRRSV产生一定的抵御能力;EB可通过下调受体CD151和CD163 mRNA表达以抵制病毒入侵,CVN可通过下调受体CD163 mRNA表达以抵制病毒入侵;EB和CVN可能因抑制了病毒入侵而使细胞抵御病毒时所需的免疫应答和应激反应因子TNF-α和HSPB1 mRNA表达降低;而EB同时还可上调IL-6 mRNA表达,以促进部分免疫应答反应而增加细胞对PRRSV的抵御能力。本研究为进一步在蛋白水平上阐明EB和CVN的抗病毒机制奠定了基础。