一氧化氮调控桃果实山梨醇脱氢酶活性的分子机理

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leonontop
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
桃果实的品质主要取决于糖酸、香气、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质等要素,其中糖酸组分、糖酸含量及糖酸比对果实内在品质的形成有着重要的影响,是决定果实风味的重要指标。本文以肥城桃为试材,研究了一氧化氮(NO)对果实体内可溶性糖及相关酶活性的影响,探讨了高效液相色谱-蒸发光检测(HPLC-ELSD)方法分离山梨醇、果糖、葡萄糖和蔗糖的混合物的条件,并克隆表达山梨醇脱氢酶重组蛋白,利用表达的重组蛋白进行酶动力学试验,结合定点突变技术和圆二色光谱分析,研究了NO对SDH空间构象的影响,进而提出NO抑制山梨醇脱氢酶活性的分子机理。研究发现:10μmol L-1NO处理显著抑制了桃果实贮藏后期可溶性糖含量的增加和果实糖酸比的变化,有效延缓了果实中糖类物质相互之间的转化,尤其保持了蔗糖相对较高的含量和相对较低的果糖、葡萄糖的含量,显著提高了贮藏期间桃果实山梨醇脱氢酶和山梨醇氧化酶的活性,提高了蔗糖磷酸合成酶的活性,对转化酶(酸性转化酶和中性转化酶)和蔗糖合成酶相关酶活的抑制作用有时间效应。四种糖的混合物利用岛津高效液相色谱仪分离。色谱柱:Phenomenex Luna5u NH2100A column (250mm×4.60mm,5micron)(Agilent, USA);流动相:乙腈-水(82.5:17.5,V/V);流速:1mL min-1;柱温:30°C;进样量:20μL。检测器:蒸发光检测器380-LC(Varian, USA);漂移管温度82°C;载气为氮气;载气流速为2L min-1。在以上条件下,四种糖组分均能很好的分离,相关系数R=0.9965-0.9999。LODs (S/N=3)和LOQs (S/N=10)分别为0.00080.0047μg和0.0020μg0.0118μg。回收率96.05%103.32%。RSD(%)为0.28%2.06%。实时荧光定量PCR试验表明,花后60d的基因表达量是花后30d的5.1倍,花后90d是花后30d的16.5倍。克隆的目的基因与已报道的序列相似度达到100%,Escherichia Coli表达的重组SDH蛋白经Ni-NTA柱纯化后具有山梨醇脱氢酶的催化功能。重组SDH催化反应的最适条件:温度35°C,pH9.0,山梨醇浓度0.20mol·L-1,Km=0.6667mol·L-1。研究发现,SDH的荧光强度随着NO浓度的增加而降低;圆二色谱分析结果表明,经NO处理之后,208nm、218nm和222nm处的吸光度分别降低了14.6%28.0%、19.8%35.7%和12.0%42.2%。本文研究发现,SDH在最适反应条件下其活性明显受到NO抑制。NO对SDH的抑制类型通过SDH氧化山梨醇的最初反应速率确定,属于非竞争性抑制,抑制常数Ki=17.5μmol·L-1,并对NO抑制SDH活性的分子机理进行了讨论。
其他文献
利用多普勒雷达、气象卫星、自动气象站等监测数据以及NCEP/NCAR再分析资料,对安徽省一次远距离台风暴雨中尺度对流系统的环流背景、内部结构及其演变进行了系统分析。结果表
能源是人类活动的物质基础,随着经济的快速发展,能源生产与消费之间的矛盾、能源与环境之间的矛盾越来越突出,发展可再生能源成为各国关注的热点。风能作为一种可再生能源可
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊
目的探讨有氧运动及中药消脂散对高脂膳食所致肥胖大鼠睾丸组织形态学结构改变的干预作用及相关机理。方法雄性sD大鼠随机分为c组(普通膳食组)、HF组(高脂膳食组)、HE组(高脂膳食+
本文以清代扶手椅造型为研究对象,依托大量家具实物图片资料和历史文献,从造型要素中的形态和装饰纹样两个方面来对清代扶手椅展开较为全面细致地研究。其研究成果为清代家具
当前,随着海洋资源开采和海洋经济范畴的拓展,一批海上风电、海洋牧场和采矿装置应运而生,非油气装备的快速发展成为推进我国海洋工程装备转型升级高质量发展的新动力。有专家表
报纸
日前,快时尚品牌Zara母公司Inditex集团在年度股东大会宣布:集团旗下7500家门店将在2019年之前实现高效节能环保;2025年之前,包括Zara、Pull & Bear、Massimo Dutti在内集团
随着网络上的数据量逐日剧增,HTML的缺陷逐渐明显,传统的Web技术已不能满足Internet发展的需求。半结构化语言XML的出现,攻克了这一难题。XML语言,具有超强的扩展性和易读性,
引洮工程是重大的民生工程,陇西县将引洮工程建设及安全运行管理作为一项重要的政治任务来抓,全力推进建立了行政首长负责制,逐级签订责任书,各级业务部门强化措施、倒排工期
纤维素酶不仅能渗透到纤维无定形区,使无定形区膨胀,而且在外切酶和内切酶的协同作用下,侵蚀微小部分的纤维结晶区,改变纤维的内部结构,减少纤维内应力,在纤维内部产生永久结