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目的:观察 STI571 体外对 c-Kit~+AML 患者骨髓细胞凋亡的影响,从而为临床应用该药治疗 AML 提供实验依据。 方法: 1. 形态学方法:在高倍显微镜下观察经瑞氏-姬萨姆染色,不同浓度梯度(0.25,0.5,1.0,10μmol/l)STI571 作用于 c-Kit~+AML 患者骨髓细胞,不同时间(24h,48h,72h)的细胞形态变化。 2. MTT 法:检测不同浓度梯度 STI571 体外对 c-Kit~+AML 患者骨髓细胞在不同时间的生长抑制作用。取 0.2ml 2x10~6 骨髓单个核细胞接种于 96孔板上,分别于 24h,48h,72h 用自动酶标仪在 570nm 处测其吸光度值。 3. 采用流式细胞仪检测不同浓度梯度 STI571 体外对 c-Kit~+AML 患者骨髓细胞作用后,在不同时间(24h,48h,72h)Caspase-3 的表达。 4. 用 RT-PCR 法检测抑凋亡基因 Survivin mRNA 和促凋亡基因 Smac mRNA 的表达水平。 结果: 1. 形态学的观察:STI571 诱导 c-Kit~+AML 患者骨髓细胞于 24 小时出现核膜皱缩,部分胞浆内可见空泡变性,48 小时达到凋亡高峰出现凋亡小体。 2. MTT 法:应用 SPSS 软件重复测量设计方差分析,Q 检验(P<0.05﹚。结果显示:c-Kit~+组与 c-Kit~-组及正常对照组相比差异有显著性(P<0.05﹚;c-Kit-组和正常对照组相比差异无显著性(P﹥0.05);凋亡高峰浓度为10μmol/l 组,对照组与各浓度组比较差异非常显著(P<0.01﹚;凋亡高峰时间为 48 小时。 3. 流式结果经统计处理结果显示:STI571 诱导 c-Kit~+的 AML 患者骨髓细胞表达 Caspase-3 上调,与 c-Kit~-相比,不同时相、不同浓度有统计学意义(P<0.05);随药物浓度增加,Caspase-3 也随之上调,凋亡高峰时相为 48 小时,c-Kit+组与 c-Kit-组及正常对照组相比差异有显著性(P<0.05), c-Kit-组和正常对照组相比差异无显著性(P﹥0.05)。 4.RT-PCR 法:STI571 诱导 c-Kit~+ AML 患者骨髓细胞随浓度的增加、