论文部分内容阅读
石斛为常用中药,为合理开发、利用这一珍稀资源,我们在已有研究的基础上,对霍山石斛、铁皮石斛、金钗石斛、马鞭石斛等抗肿瘤药理活性部位进行了比较研究。本文以人宫颈癌HelaS3,肝癌HepG2两种不同来源的肿瘤细胞为实验对象,对霍山石斛、铁皮石斛、金钗石斛、马鞭石斛等四种石斛进行了抗肿瘤活性方面的研究。采用MTT法探讨了四种石斛不同溶剂提取部分对人宫颈癌HelaS3和肝癌细胞株HepG2的体外抑制作用;应用Hoechst33342/PI双染法和DNA琼脂糖凝胶电泳加以凋亡的定性确认;应用RT-PCR观察不同浓度石斛提取物作用后原癌基因c-myc表达的变化。结果表明:四种石斛水提物、石油醚、乙酸乙酯及正丁醇提取部位对HelaS3和HepG2细胞株均有不同程度的抑制作用,且在所选浓度范围内呈剂量依赖性和时间依赖性,提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用随着培养的进行逐渐增强,至第4天最大,然后下降,抑制率先上升后下降。对HelaS3细胞而言,霍山石斛水提物,铁皮石斛乙酸乙酯提取物,金钗石斛和马鞭石斛水提物抑瘤效果相对其他提取物好,半数抑制浓度IC50分别是11.63 mg/ml,14.18 mg/ml,15.11 mg/ml和5.89 mg/ml;对HepG2细胞而言,霍山石斛石油醚提取物,铁皮石斛石油醚提取物,金钗石斛和马鞭石斛水提物抑瘤效果相对其他提取物好,半数抑制浓度IC50分别是8.53 mg/ml,10.81 mg/ml,3.80 mg/ml和17.76 mg/ml。激光共聚焦显微镜观察:对照组活细胞染成蓝色,核呈正常结构;加提取物后红色细胞数增多,核呈固缩状或圆珠状,有明显的染色质凝集。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示:相比对照组,处理组细胞表现出典型的凋亡特征,提取物作用72h后,细胞DNA电泳后出现阶梯状条带,且高浓度提取物处理后梯度条带较低浓度明显。RT-PCR结果显示:随着提取物作用浓度的增加,原癌基因c-myc的表达被明显抑制。综上所述:霍山石斛、铁皮石斛、金钗石斛、马鞭石斛不同极性部位提取物对人宫颈癌HelaS3,肝癌HepG2均有不同程度的抑制作用;提取物对细胞c-myc基因表达有抑制作用,而大量研究表明,c-myc基因表达与肿瘤的发生有着密切关系,推测石斛提取物抑制原癌基因c-myc的表达可能是其抗肿瘤活性作用机理之一。