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目的:针对2018年6月-12月从郑州大学某教学医院收集62株无菌血标本碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌(Carbapenem-Rsistant Klebsiella pneumoniae,CRKP),对其进行耐药分子特征和毒力特征研究,为防控CRKP进一步播散提供数据支撑,也为临床治疗提供理论依据。方法:(1)采用微量肉汤稀释法和琼脂稀释法测定临床常用的16种抗生素对菌株的最低抑菌浓度MICs,多位点序列分型和血清型检测分析菌株ST型及血清型。(2)依据耐药表型PCR检测包括碳青霉烯酶基因在内的耐药基因,同时检测毒力标记基因rmpA2、rmpA、peg344、iroB、iucA。(3)筛选blaKPC-2和rmpA2基因双阳性的疑似高毒力CRKP菌株,通过S1-PFGE和southern杂交技术确定blaKPC-2、rmpA2基因所在的耐药和毒力质粒大小。(4)采用PCR mapping方法以pVir-CR-hvKP4质粒为参比分析毒力质粒分子特征。对blaKPC-2、rmpA2疑似位于同一质粒的菌株KP18-2079进行全基因组测序分析。(5)拉丝实验对目标菌株进行黏性表型测定同时建立小鼠腹腔感染模型评价菌株毒力。结果:(1)血流感染的62株CRKP临床分离菌株具有多重耐药表型,其中54%分离自ICU科室,年龄集中分布在40-80岁之间,以男性为主,其中ST分型及血清型以ST11-K64为主。(2)62株CRKP以携带KPC碳青霉烯酶为主,占比为89%(55/62),35株携带毒力标记基因,占比为56%(35/62),其中24株携带KPC质粒和pVir-CR-HvKP4-like毒力质粒,毒力质粒大小在190-300 kb之间。(3)62株菌株中只有一株具有高黏表型且有5株携带毒力标记基因rmpA2和iucA的ST11-K47菌株在小鼠体内腹腔感染模型中具有毒力增强表型。(4)肺炎克雷伯菌KP18-2079携带的质粒pKP18-2079-KPC和pKP18-2079-vir分别是通过质粒p1-L388和pKPC-L388互换重组形成,导致blaKPC-2整合在毒力质粒上,pKP18-2079-vir质粒同时携带多个耐药基因。结论:通过对62株血流感染的CRKP耐药及毒力特征研究分析,表明临床分离的CRKP多重耐药情况严重,极大限制了抗生素的使用。ST11-K64是62株CRKP主要的流行克隆,携带毒力标记基因ST11-K47型的CRKP有潜在毒力增强表型。多重耐药菌株在抗生素选择压力下使耐药基因和毒力基因位于同一质粒上,导致发生协同传播,因此需要引起关注。