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头孢羟氨苄具有广谱、高效和毒副作用小的特点,是重要的抗生素品种之一。目前β-内酰胺抗生素的合成中主环与侧链连接步骤主要采用化学偶联合成方法,反应条件苛刻,需要繁琐的基团保护与去保护步骤,消耗大量原料同时产生许多污染物。酶促合成方法是β-内酰胺抗生素实现温和反应、减少反应步骤、清洁生产的有效途径。论文研究了以D-对羟基苯甘氨酸甲酯作为酰基供体酶促合成头孢羟氨苄的方法。同时,筛选了一系列不同极性的有机溶剂,并考察了固定化青霉素G酰化酶IPA-750的酶量、反应温度、反应时间和底物浓度与投料比等因素对酶促反应的影响,成功地实现了二氯甲烷介质中酶促合成头孢羟氨苄的新途径。合成产率和S/H比值分别达到了45%和0.45。论文研究比较了二氯甲烷与其它有机溶剂的混合体系对酶促合成头孢羟氨苄的影响,结果发现在二氯甲烷/水两相体系60/40(v/v)中可以提高7-ADCA和D-对羟基苯甘氨酸甲酯的转化率。在25℃,pH 6.0,酶量32.4 IU,100 mmol/L7-ADCA和200 mmol/L D-HPGM的底物浓度条件下反应24 h,反应的合成产率为59.8%,S/H比值达到了0.6。论文研究建立了青霉素G酰化酶的固定化方法。详细研究了不同的固定化载体,固定化时间,游离酶浓度对固定化酶活性的影响。同时比较了不同固定化酶的热稳定性,酸碱耐受性,以及在二氯甲烷中的稳定性。研究发现,通过活化的交联琼脂糖凝胶(Sepharose CL-6B)固定化得到的固定化青霉素G酰化酶(Fseph-PGA)在热稳定性、酸碱耐受性还是二氯甲烷中的稳定性明显提高。同时,Fseph-PGA在上述各种特性上与商业化的固定化青霉素G酰化酶(IPA-750)都具有可比性。本论文主要成果是建立了有机介质及有机溶剂/水两相介质体系中酶促合成头孢羟氨苄的方法,研究了有机介质对固定化青霉素G酰化酶催化活性的影响;建立了在活化Sepharose CL-6B载体上固定青霉素G酰化酶的固定化方法。