【摘 要】
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目的1.建立吉非替尼(Gefitinib,Gef)耐药的人肺腺癌细胞株A549/GR,为研究肿瘤细胞对吉非替尼耐药的分子机制及筛选靶向药物分子标记提供细胞模型;2.进一步探讨胰岛素样生长因
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目的1.建立吉非替尼(Gefitinib,Gef)耐药的人肺腺癌细胞株A549/GR,为研究肿瘤细胞对吉非替尼耐药的分子机制及筛选靶向药物分子标记提供细胞模型;2.进一步探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)信号通路在表皮生长因子受体抑制齐(EGFR-TKIs)耐药细胞中的作用机制方法以人肺腺癌细胞株A549为亲本细胞,在体外采用低浓度逐步加量诱导法,建立吉非替尼耐药的细胞株A549/GR;自然生长状态下及HE染色后,双目倒置显微镜下观察并记录A549/GR细胞形态学的改变;CCK-8法测定亲本与耐药细胞株对吉非替尼的敏感程度;采用CCK-8法进行生长曲线绘制及细胞群体倍增时间测定;以亲本细胞株为对照,Q-RT-PCR去检测耐药细胞株EGFR、IGF1R、AKT1、ERK1基因在mRNA水平表达的改变。结果1.经过10个月的诱导,建立的A549/GR细胞可在含30umol/L吉非替尼的培养基中稳定生长。普通光学显微镜下观察显示,A549/GR细胞变大,且大小不一,细胞极性消失,有变长梭形的趋势,细胞核分叶增多;CCK-8法测得A549/GR细胞的耐药指数为亲代细胞的6.00倍;A549/GR细胞倍增时间较A549细胞缩短(31.97h VS34.85h,p<0.01);Q-RT-PCR显示,与亲代细胞相比,A549/GR细胞的AKT1、ERK1基因在mRNA水平表达明显上调(P<0.05),IGF1R、EGFR基因在mRNA水平轻度上调(P<0.05)。结论1.成功建立吉非替尼耐药细胞株,可用于耐药机制的研究。2.吉非替尼耐药细胞株形态学改变与耐药性产生一致。3.在EGFR-TKIs耐药细胞株中,IGF-1R及其下游通路PI3K-AKT、 RAS-RAF-ERK/MAPK信号分子表达上调,IGF1R信号通路的活化与吉非替尼耐药性的产生有关。
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