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【目的】明确p Tyr284-ACK1及其相关信号通路(PTEN/AKT)分子在HCC中的表达情况;通过外源性小分子抑制剂抑制ACK1活性,观察PTEN/AKT信号通路活性变化及细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的改变,以期寻找HCC可能的药物治疗靶点,为HCC的治疗提供理论依据。【方法】IHC检测p Tyr284-ACK1、p Ser473-AKT、PTEN等蛋白在HCC组织中的表达情况,并分析其临床病理意义。AIM-100、Dasatinib干预SK-Hep-1、Hep G2细胞培养,MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖、周期和凋亡情况;划痕实验、Transwell实验检测迁移和侵袭能力;q PCR和Western Blot分别从m RNA和蛋白水平检测ACK1、p Tyr284-ACK1、AKT、p Ser473-AK T、m TOR、PTEN、EGFR等分子的表达变化情况。【结果】1.p Tyr284-ACK1蛋白在HCC组织中阳性率为69.70%(92/132),其表达水平(高表达率为31.06%)高于配对癌旁组织(18.94%),差异有统计学意义(P<0.05);术前AFP≥400μg/L组、肉眼癌栓组和肝外转移组中p Tyr284-ACK1高表达率为分别为39.19%、52.38%和51.35%,表达水平均高于AFP<400μg/L组(20.69%)、无肉眼癌栓组(27.03%)和未转移组(30.14%),差异有统计学意义(P<0.05)。2.p Ser473-AKT蛋白在HCC组织中阳性率为74.24%(98/132),其表达水平(高表达率为43.94%)高于配对癌旁组织(30.30%),差异有统计学意义(P<0.05);HCC低分化组中p Ser473-AKT表达水平(高表达率为56.60%)高于高分化组(38.71%)和中分化组(23.53%),差异有统计学意义(P<0.05)。3.PTEN蛋白在HCC组织中阳性表达率为75.00%(99/132),明显低于配对癌旁组织98.48%(130/132),差异有统计学意义(P<0.05);在术前AFP≥400μg/L组、HCC低分化组、包膜侵犯组、肉眼癌栓组、复发组和肝外转移组中PTEN阳性率分别为82.43%、81.13%、69.91%、90.48%、77.27%和83.78%,均高于术前AFP<400μg/L(48.28%)、HCC中高分化(61.29%、47.06%)、无包膜侵犯组(52.63%)、无肉眼癌栓(63.06%)、无复发组(47.73%)及无肝外转移组(61.05%),差异有统计学意义(P<0.05)。4.p Tyr284-ACK1蛋白表达与p Ser473-AKT正相关(rs=0.336,P<0.001),与PTEN负相关(rs=-0.441,P<0.001)。5.p Tyr284-ACK1、p Ser473-AKT、PTEN的表达与HCC患者无瘤生存期无明显相关性(P>0.05);p Tyr284-ACK1低表达患者中位总生存期22.15个月,高于高表达患者(16.79个月),差异具有统计学意义(P<0.05);p Ser473-AKT的表达与总生存期无明显相关性;PTEN低表达患者中位总生存期18.78个月,低于正常表达患者(23.88个月),差异具有统计学意义(P<0.05)。6.在一定浓度范围内,AIM-100和Dasatinib均能抑制SK-Hep-1和Hep G2细胞的增殖(P<0.05);经药物处理后,细胞周期G1期阻滞明显,且与未处理细胞比较凋亡明显。7.细胞划痕实验中,SK-Hep-1经处理后均有向划痕中央迁移趋势,程度较未处理细胞弱;Hep G2细胞迁移均不明显。Transwell侵袭实验中,SKHep-1细胞经处理后穿膜细胞数少于未处理细胞(P<0.05);Hep G2处理后与未处理细胞比较,差异无统计学意义(P>0.05)。8.q PCR结果显示:在m RNA水平上与未处理细胞比较:(1)SK-Hep-1-AIM-100细胞ACK1、AKT、PTEN表达上调,m TOR和EGFR表达下调;(2)SK-Hep-1-Dasatinib细胞AKT、PTEN表达上调,ACK1、m TOR和EGFR表达下调;(3)Hep G2-AIM-100细胞ACK1、AKT、m TOR和EGFR表达下调,PTEN表达上调;(4)Hep G2-Dasatinib细胞EGFR表达下调,ACK1、AKT、m TOR、PTEN表达均上调。9.Western Blot结果显示:(1)SK-Hep-1经AIM-100处理后ACK1、p Tyr284-ACK1、p Ser473-AKT、m TOR、EGFR蛋白表达下调,PTEN表达上调(P<0.05);(2)经Dasatinib处理后,ACK1、p Tyr284-ACK1、p Ser473-AKT、m TOR、EGFR等蛋白表达下调,PTEN表达上调(P<0.05);(3)Hep G2经AIM-100处理后,p Ser473-AKT、PTEN表达上调(P<0.05);(4)经Dasatinib处理后,p Ser473-AKT、PTEN表达上调(P<0.05)。其余蛋白表达改变均无统计学意义(P>0.05)。【结论】1.p Tyr284-ACK1可能参与肝细胞癌的发生发展,并促进侵袭转移;2.p Tyr284-ACK1在肝癌中可能通过PTEN/AKT信号转导通路发挥促癌作用;与p Ser473-AKT正相关,协同发挥促癌作用;与PTEN负相关,拮抗PTEN的抑癌基因作用;3.联合检测p Tyr284-ACK1和PTEN有助于对患者的术后复发和生存期进行有效预测;4.ACK1可能通过EGFR/PTEN/AKT/m TOR途径促进肝癌细胞的生长增殖、侵袭,调节细胞周期并抑制凋亡;5.AIM-100和Dasatinb可抑制ACK1蛋白活性,并通过EGFR/PTEN/AKT/m TOR途径抑制肝癌细胞的增殖、侵袭,促进肿瘤细胞的凋亡。