论文部分内容阅读
卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其死亡率居妇科恶性肿瘤之首。化疗原发和继发耐药是导致卵巢癌患者存活率低的重要因素。顺铂和DNA可以形成链内和链间交联,从而引起DNA损伤。研究表明一些基因间长片段非编码RNA(lincRNAs)广泛参与了肿瘤细胞DNA损伤应答的各个环节。因此,lincRNAs可能参与了卵巢癌铂类耐药发生。然而,目前关于"lincRNAs如何参与卵巢癌顺铂耐药的产生"的认识依旧有限。1)本论文通过顺铂间隔刺激法建立了卵巢癌顺铂耐药细胞株。通过克隆形成率法分析,发现细胞株A2780-DR对顺铂、紫杉醇和双氧水的抗性都明显增强。通过转录组测序分析卵巢癌顺铂敏感和耐药细胞株,结合生物信息学分析获得了 436个差异表达的lincRNAs。经荧光定量 PCR验证,linc-RECK-3,H19,LUCAT1,LINC00961 和 linc-CARS2-2等在耐药细胞株中明显增加,而linc-TNFRSF19-1和LINC00515在耐药株中明显降低。H19和LUACT1在癌组织中高表达,且H19高表达的卵巢癌患者容易复发。2)H19在敏感细胞株中能被顺铂诱导表达,而在耐药细胞株中不能被诱导。耐药细胞株中H19被干扰后,细胞内H19的表达量明显下降,同时细胞对顺铂的敏感性也明显增加。裸鼠实验也证实了耐药细胞中H19被干扰后增加了对顺铂的敏感性。3)采用非标记定量蛋白质组学分析寻找被H19调控并参与顺铂耐药发生的蛋白。耐药细胞株与敏感细胞株中差异表达蛋白有113个,其中有27个是NRF2靶蛋白。KEGG分析发现有6个NRF2靶蛋白参与还原型谷胱甘肽(GSH)代谢。Western-blot实验发现有7个蛋白(ALDH1A1,NQO1,GSR,G6PD,GCLC,GCLM和NRF2)均在耐药细胞中高表达。与耐药细胞比较,敏感细胞(A2780和A2780-DR/H19si)对双氧水更敏感,且细胞内GSH水平更低。耐药细胞NRF2干扰或GSH合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺(BSO)处理后均增加了对顺铂的敏感性。本论文研究发现了一些与顺铂耐药有潜在关系的lincRNAs,为后续深入研究这些lincRNAs参与顺铂耐药分子机制提供基础。论文首次提出H19通过NRF2通路调节GSH代谢促进顺铂耐药,加深了我们对顺铂耐药机制的理解。为肿瘤化疗效果的提升提供了理论基础。