苹果生长期多酚组成变化及SPE-HPLC分析测定方法的建立

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本文以秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹四个苹果品种为材料,对苹果果实发育过程中总酚、中性酚、酸性酚、原花青素含量进行了分析。通过大孔吸附树脂和葡聚糖凝胶LH-20对苹果多酚进行预处理,建立了HPLC测定苹果多酚的检测方法。测定了四个品种苹果多酚中各单酚种类及其含量。为系统研究苹果多酚提供了基础性数据。研究结果表明:1、在苹果的整个生长时期(6月-10月),总酚、中性酚、酸性酚及原花青素含量均以澳洲青苹最高;其余三个品种在整个生长时期内总酚含量由高到低依次为富士,秦冠,粉红女士;在6月、7月、9月、10月份中性酚含量高低依次为富士,粉红女士,秦冠;在6月、8月、9月、10月酸性酚含量由高到低依次为秦冠,富士,粉红女士。幼果时期(6月),粉红女士中的总酚、中性酚、酸性酚含量最低,分别为澳洲青苹的62%、57%和57%;原花青素含量以秦冠最低为澳洲青苹的25%。2、各品种苹果中总酚均在6月到7月间下降,随后又开始增加,9月份达最高,果实成熟期(9月-10月)又开始下降。秦冠苹果中性酚果实发育期(6月-8月间)先减少后增加,其它品种苹果中性酚在该发育阶段均呈先增加而后再减少的趋势;粉红女士和澳洲青苹酸性酚随着果实的发育逐渐增加,果实成熟期(9月-10月)又开始减少,秦冠和富士酸性酚一直呈逐渐下降趋势;四个品种苹果中果实发育期随着中性酚和酸性酚的减少,原花青素含量相应逐渐增加,果实成熟期(9月-10月)又开始下降。3、分析苹果生长时期各品种中多酚物质组成的变化,结果表明,随着果实的发育,酸性酚、中性酚及原花青素在总酚中所占比重也发生变化。富士苹果果实发育初期(7月),中性酚为果渣中主要多酚类物质,占总酚含量的74.7%,而酸性酚和原花青素仅分别占13.79%和11.51%。随着果实发育,中性酚和酸性酚含量逐渐减少,原花青素含量逐渐增加。成熟期(10月)原花青素占总酚比例上升为46.56%,中性酚和酸性酚分别下降为41.23%和12.2%。其它品种也呈相应趋势。4、D4020、LX-1、XDA-5这三种大孔吸附树脂对苹果渣多酚的静态吸附和洗脱试验结果表明,D4020树脂的吸附率和洗脱率均高于其它树脂,试验选择D4020树脂作为多酚初步纯化用树脂。5、大孔吸附树脂初步纯化秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹四个品种苹果渣多酚得率分别为:63.8%、72.5%、62.1%和79.1%;纯度分别为:23.5%、54.6%、49.8%和57.6%。LH-20进一步纯化秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹四个品种苹果渣多酚得率分别为:89.5%、88.4%、78.3%和73.8%;纯度分别为:85.1%、99.2%、94.4%和89.3%。6、最终确定中性酚色谱分离条件为:色谱柱insertsil ODS-3 250~*4.6mm,柱温25℃、流速1.0mL/min、进样量10μL、检测波长280nm、流动相为醋酸水溶液和乙腈,线性梯度洗脱;酸性酚分离条件:色谱柱insertsil ODS-3 250~*4.6mm,柱温25℃、流速0.8mL/min、进样量10μL、检测波长280nm,流动相为醋酸水溶液和乙腈,线性梯度洗脱。7、液相色谱分析结果表明:四个品种苹果HPLC检出中性酚含量均高于酸性酚,中性酚中澳洲青苹的各单酚含量均高于其它品种,秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹中性酚分别占总酚的93.4%、100%、98.4%和99.2%。各品种中单酚均以金丝桃苷最高,分别占秦冠、富士、粉红女士、澳洲青苹所检测总酚的56.06%、83.91%、62.69%、和32.26%。秦冠、富士、粉红女士和澳洲青苹经HPLC检测到总酚含量分别占上样前总多酚的89.5%、95.6%、78.86%和93.28%,经分析,其余未检出物可能为其它原花青素及其聚合物。
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