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目的：本研究通过建立小鼠同种异基因角膜移植模型，予以全身应用鞘氨醇-1-磷酸受体调节剂1（S1P1），观察S1P1对小鼠角膜移植植片免疫排斥的影响；探索S1P1联合用药模式对小鼠角膜移植植片免疫排斥的影响；通过检测体内免疫因子水平和蛋白的表达，探索S1P1抑制角膜植片免疫排斥的作用机制。方法：1、建立C57BL/6小鼠为供体，BALB/C小鼠为受体的同种异基因角膜移植实验模型，随机分为五组，每组7只，术后采用腹腔注射给药，自手术当日开始，A组为不含药物的安慰剂对照组；B组S1P1(sphingosine1-phosphate receptor-1)5mg/kg/d；C组地塞米松（dexamethasone）1mg/kg/d；D组雷帕霉素（rapamycin）2mg/kg/d；E组环孢霉素A（cyclosporine A，CsA）5mg/kg/d，每日1次，连续给药14d。术后10天拆除小鼠角膜移植植片缝线，术后2周内每日于手术显微镜下观察小鼠角膜植片变化情况并记录植片生存率指数，超出2周时间后隔日观察1次，至发生排斥后处死实验动物。2、BALB/C小鼠随机分为A、B、C、D、E、F、G七组，每组7只，建立C57BL/6-BALB/C小鼠角膜移植模型。A组为不含药物的安慰剂对照组，B组为S1P1（5mg/kg）单独用药组；C组为地塞米松（1mg/kg）单独用药组；D组为S1P1（5mg/kg）联合雷帕霉素（2mg/kg）用药组，E组为S1P1（5mg/kg）联合环孢霉素（5mg/kg）用药组，F组为雷帕霉素（2mg/kg）单独用药组，G组为环孢霉素（5mg/kg）单独用药组。术后采用腹腔注射给药，自手术当日开始，每日1次，连续给药14d。术后10天拆除角膜缝线。对各组小鼠移植后角膜排斥时间进行观察，术后2周内每日1次，超出2周者隔日1次，记录植片生存曲线，至发生排斥后处死实验动物。3、BALB/C小鼠随机分为七组，每组5只，建立C57BL/6-BALB/C小鼠角膜移植模型。术后分别给予上述分组方案注药，连续腹腔注射14d。术后14d时处死小鼠，取颈部引流淋巴结、腹腔肠系膜淋巴结、外周血清、脾脏等行流式细胞学检测，探讨CD4+T淋巴细胞和CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的分布和聚集状态。4、BALB/C小鼠同上随机分为七组，每组10只，建立C57BL/6-BALB/C小鼠角膜移植模型。术后分别给予上述分组方案注药，连续腹腔注射14d。术后14d时处死小鼠，所有处死小鼠取外周血清行Elisa法检测IL-2、IL-10、IFN-及TGF-1细胞因子含量。每组取5只小鼠角膜标本行RealtimePCR法检测小鼠角膜植片中IL-2、IL-10、IFN-、TGF-1及Foxp3mRNA表达情况，另对5只小鼠移植后角膜植片进行常规HE染色，并对CD4+T细胞以及细胞因子IL-2、IL-10、IFN-、TGF-1进行免疫荧光染色。结果：1、同种异体角膜移植安慰剂对照组角膜植片平均存活时间仅为（15.14±2.5d）；S1P1联合雷帕霉素组移植角膜植片出现排斥时间明显延长为（38.71±9.2d）；S1P1联合环孢霉素组角膜植片存活时间为（32.71±7.2d）；S1P1单独用药组角膜植片存活时间为（37.85±0.8d），三组用药组与对照组比较均具有统计学差异（p＜0.01)。2、流式细胞仪结果显示S1P1单独用药组能显著增加颈部淋巴结和肠系膜淋巴结中CD4+T细胞及Treg细胞的比例（p＜0.01)，而在S1P1联合雷帕霉素组检出的颈部淋巴结和肠系膜淋巴结中CD4+T细胞及Treg细胞的比例，与对照组相比，也有统计学意义（p＜0.05)。3、S1P1联合雷帕霉素组小鼠角膜植片中TGF-β1和IL-10mRNA表达较对照组明显增高(p<0.01),体现出协同抑制作用；而在CsA单独用药组中IL-2和IFN-γmRNA表达降低(p<0.05)。免疫荧光染色证实角膜植片中上述细胞因子含量同mRNA表达是基本一致的。S1P1单独用药组和S1P1联合雷帕霉素组均能明显减少CD4+T细胞在角膜植片中的浸润。4、Elisa血清学检测结果发现，在S1P1单独用药组，IL-10和TGF-β1含量较对照组有明显升高（p＜0.01)。在S1P1联合雷帕霉素组，未发现有统计学差异（p＞0.05)，在S1P1单独用药组，IFN-γ含量升高有统计学意义（p＜0.05)，IL-2的表达则各组之间未见显著性差异（p＞0.05)。结论：1、S1P1联合雷帕霉素、S1P1联合环孢霉素均能够显著延长小鼠角膜移植术后植片的存活时间，体现出S1P1联合用药对小鼠角膜移植植片发生免疫排斥具有协同抑制作用。2、S1P1能够显著影响淋巴细胞的分布，增加颈部引流淋巴结和腹腔肠系膜淋巴结中CD4+T细胞和Treg细胞的比率。S1P1联合雷帕霉素亦能够增加引流至局部淋巴结之淋巴细胞，但程度不及前者。3、S1P1联合雷帕霉素能够显著增加角膜植片中细胞因子TGF-β1和IL-10mRNA和蛋白的表达，体现出协同抑制作用。S1P1单独用药或S1P1联合雷帕霉素均能够减少CD4+T细胞在角膜植片中的浸润。4、S1P1能够显著升高血清中细胞因子IL-10和TGF-β1的表达水平，IFN-γ的表达也有升高。