中药方剂—五子衍宗丸对肾虚精亏证大鼠睾丸支持细胞分泌功能的影响

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目的:中医学认为“肾精”在男性生育中有着重要的作用,有研究表明肾精亏虚是男性不育的主要病因之一,五子衍宗丸是补肾益精的经典方剂,对生精功能有明显地改善作用。本课题采用雷公藤多苷灌胃造模方法复制大鼠肾虚精亏模型,研究五子衍宗丸对大鼠生精功能和支持细胞分泌功能的影响,并探讨五子衍宗丸改善雄性大鼠生精功能和影响睾丸支持细胞分泌功能的相应机制。方法:1.研究方法:本课题采用300-350g SD雄性大鼠25只,随机分为正常组、模型组、低剂量五子衍宗丸组、中等剂量五子衍宗丸组和高剂量五子衍宗丸组,共五组,每组各5只。除正常组外,其他四组每天20mg·kg-1雷公藤多苷灌胃连续30天,复制肾虚精亏大鼠模型。与此同时正常组每天0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶剂灌胃、五子衍宗丸低剂量组0.5·kg-’五子衍宗丸混悬液灌胃,五子衍宗丸中剂量组1.0.kg-1五子衍宗丸混悬液灌胃,五子衍宗丸高剂量组2.0·kg-1五子衍宗丸混悬液灌胃连续30天,然后腹主动脉抽血处死大鼠。血液和睾丸组织进一步处理用来测定基因和蛋白:①记录各组大鼠体重,以精密天平称重,计算睾丸指数及附睾指数。②根据ELISA试剂盒的说明,测定血清中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、抑制素B(inhibin B,INHB)、睾酮(testosterone,T)的浓度。③实时PCR和WB测定睾丸组织标本中雄激素结合蛋白(Androgen binding protein,ABP)基因和转铁蛋白(transferrin TF)。4Johnson评分来分析睾丸组织的病理学改变。2.统计学方法:所有数据均以x士s表示,采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析(ANOVA),两两比较方差齐者采用LSD检验,方差不齐者采用Dunnett’s T3检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.模型组大鼠与对照组大鼠相比,血清中的FSH浓度显著升高,INHB和T浓度显著下降(P<0.01)。五子衍宗丸高、中剂量组大鼠FSH水平显著下降,INHB和T显著升高(P<0.05)。五子衍宗丸低剂量组大鼠血清中FSH. INHB和T浓度没有明显改变(P>0.05)。2.与对照组相比,模型组大鼠睾丸组织中ABP mRNA水平明显上调(P<0.05)。五子衍宗丸高剂量组明显下调雷公藤多苷诱导的ABP mRNA的改变(P<0.05),五子衍宗丸中剂量组和高剂量组中ABP mRNA没有明显改善。3.与对照组相比,模型组大鼠睾丸组织中TF表达显著下降(P<0.01),五子衍宗丸高剂量组大鼠睾丸组织中TF表达显著升高(P<0.01),五子衍宗丸中剂量组和低剂量组大鼠TF表达没有明显改变。4.与对照组相比,模型组大鼠睾丸组织Johnson分数显著下降(P<0.01),五子衍宗丸高剂量组和中剂量组大鼠Johnson分数显著升高(P<0.01),五子衍宗丸低剂量组大鼠Johnson分数没有明显改变(P>0.05)。结论:本次研究显示,五子衍宗丸对于生精功能的保护很可能是因为,五子衍宗丸可以恢复睾丸组织中的支持细胞的生物标志物-ABP, INHB和TF的水平。但是,中药的作用机制比较复杂,因而五子衍宗丸对于生精功能的更为详细的机制还有待进一步研究。
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