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目的:探讨运用RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胰腺癌细胞恶性行为的影响,为胰腺癌基因治疗提供新的靶点和思路。方法:构建反义Bmi-1真核表达载体转染人胰腺癌PANC-1细胞,运用MTT、荧光显微镜下观察、Western-Blot等技术检测转染效果;运用流式细胞术检测细胞周期、凋亡变化;RT-PCR检测P16INK4A表达变化;甲基化特异性PCR检测P16INK4A启动子甲基化变化。结果:(1)成功构建反义Bmi-1真核表达载体并且转染效率较高、效果明显。(2)转染后细胞周期出现阻滞,凋亡明显增加。(3)转染后P16INK4A表达上升其启动子甲基化程度下降。结论:Bmi-1可作为胰腺癌基因治疗的靶点,Bmi-1可能是通过影响启动子甲基化而实现对P16INK4A表达的调控。