【摘 要】
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为了对目的基因的功能进行研究,我们首先构建了目的基因的原核表达体系.将编码魔芋凝集素成熟蛋白的基因序列构建到了pET（Novagen）系列的表达载体中,然后转化大肠杆菌BL21和ply
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为了对目的基因的功能进行研究,我们首先构建了目的基因的原核表达体系.将编码魔芋凝集素成熟蛋白的基因序列构建到了pET（Novagen）系列的表达载体中,然后转化大肠杆菌BL21和plys菌株,在IPTG的诱导下表达出了目的蛋白,并对目的蛋白进行了纯化.我们进一步构建了目的基因的植物表达体系.将pBI121中的报告基因（gus）替换为目的基因MY02,构建了一个能有效转化双子叶植物的表达载体pBI121-MY02,然后将质粒pBI121-MY02中的目的基因和CaMV35S启动子切下并插入到了质粒pCAMBIA2300的多克隆位点处,构建了一个能同时转化单、双子叶植物的高效表达载体pCAMBIA2300-MY02.然后采用冻融法成功地将重组质粒转化到了根癌农杆菌菌株EHA105中.然后采用农杆菌介导的烟草叶盘转化法,将目的基因转入模式植物烟草中,在诱导生根移栽后对烟草苗进行PCR检测.并对部分PCR阳性苗进行了Western杂交、Southern杂交.Western杂交结果显示PCR阳性的烟草苗能够表达魔芋凝集素蛋白.Southern杂交结果显示目的基因已经整合到了烟草的基因组中.
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