论文部分内容阅读
目的:脑胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤,其侵袭性强,术后复发快,是神经外科最棘手的难治性肿瘤之一,目前为止临床治疗效果仍不尽人意。治疗上的差异无疑是其重要的影响因素,但肿瘤内在的生物学特性,特别是分子水平的差异才应该是关键所在。近年来,通过对人脑胶质瘤分子遗传学的研究,人们已认识到脑胶质瘤的发生、发展是一个复杂的多步骤连续过程,涉及到粘附分子、酶类、细胞因子、基因调控、细胞周期进展改变、信号传导途径异常等多方面的因素。近年的研究证实,骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种具有多种功能的细胞基质蛋白,有助于多种肿瘤的生长、侵袭和转移,是一种新的肿瘤标记物。基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)是降解细胞外基质(extracelluar matrix,ECM)的重要蛋白水解酶,ECM的降解一方面引起细胞外基质这种屏障的破坏,使瘤细胞更容易向周围组织侵袭,另一方面,有利于肿瘤内新生血管的形成,故MMP-9在胶质瘤的侵袭过程中起着非常重要的作用。因此通过检测OPN和MMP-9在正常脑组织、低级别和高级别胶质瘤中的表达,探讨OPN和MMP-9在人脑胶质细胞瘤中的表达及其临床意义,并同时检测微血管密度(MVD)的表达情况了解前两个指标是否在促进肿瘤血管增殖方面起到一定作用。方法:收集河北医科大学第二医院神经外科2007年2月-2008年5月手术治疗的50例胶质瘤病人(其中男性31例,女性19例)的手术标本,年龄10-74岁,平均年龄46.66±16.85岁。按WHO(2000年)神经系统肿瘤分类标准明确病理诊断(分类和分级),其中Ⅰ级8例,Ⅱ级16例,Ⅲ级16例,Ⅳ级10例。另取因脑皮质造瘘的正常脑组织8例作为对照。所有标本均经4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋。制成5微米切片以备免疫组化染色。免疫组化结果判定:每张切片在阳性表达较高区随机选择5个高倍镜视野(×400),连续计数至少1000个肿瘤细胞。首先将染色强度分级打分:0分为无色阴性,1分为淡黄色弱阳性,2分为棕黄色中等阳性,3分为棕褐色强阳性。(染色深浅与背景着色相对比)。再将阳性细胞所占的百分比打分:0分为阴性,1分为阳性细胞≤10%,2分为11%-50%,3分为51%-75%,4分为>75%。染色强度与阳性细胞百分比的乘积>3分才算免疫反应阳性。计数微血管密度的方法:瘤组织内阳性着色的单个内皮细胞或内皮细胞簇计为1个阳性血管标记,每例观察切片1张,避开肿瘤坏死或出血区域,在低倍镜(×40)下选择微血管最丰富区,即“热点”(“hot spot”) ,在高倍视野(×200)下计数,计数5个200倍视野下的血管数,其算术平均数计为该例切片的MVD测定值。不同组别胶质瘤的MVD用X±S表示。统计学方法:根据数据采集的不同方法及统计学处理的不同要求,选用单因素方差分析,χ2检验,t检验,t’检验和Spearman等级相关分析统计学方法。使用SPSS13.0统计软件处理。P<0.05有统计学意义。结果:实验结果显示OPN与MMP-9在50例脑胶质瘤中表达阳性率分别为72.0%,66.0%,在正常脑组织中表达阳性率分别为12.5%,0.0%。MVD在胶质瘤组和正常脑组织中的表达均值分别为36.71±16.79、3.91±0.60。OPN、MMP-9、MVD在肿瘤组和正常脑组织组之间的差异显著且均有统计学意义(P<0.01)。OPN、MMP-9在高级别肿瘤组(Ⅲ、Ⅳ级)中表达阳性率分别为88.5%,84.6%,OPN、MMP-9在低级别肿瘤组(Ⅰ、Ⅱ级)中表达阳性率分别为54.2%,45.8%,MVD在高级别肿瘤组(Ⅲ、Ⅳ级)和低级别肿瘤组(Ⅰ、Ⅱ级)中的表达均值分别为50.53±7.82,21.73±9.18,OPN、MMP-9、MVD在高级别肿瘤组(Ⅲ、Ⅳ级)和低级别肿瘤组(Ⅰ、Ⅱ级)之间的差异显著且均有统计学意义(P<0.01)。OPN、MMP-9表达阳性肿瘤组的MVD值分别为42.82±14.07,44.19±12.74,表达阴性肿瘤组的MVD值分别为20.98±12.65,22.18±14.10,两者MVD差异显著(P<0.01)。在低级别组中,同时阳性表达OPN、MMP-9的MVD值为33.14±2.19,OPN、MMP-9只有一个阳性表达的MVD值为15.62±0.84,OPN、MMP-9都阴性表达的MVD值为14.41±1.55,前者与后两者相比差异有显著性(P<0.01),后两者之间相比差异不显著无统计学意义(P>0.05)。OPN与MMP-9表达呈正相关(r=0.82,P<0.01)。结论:1、胶质瘤中OPN、MMP-9、MVD的表达显著高于正常脑组织。OPN、MMP-9、MVD在高级别肿瘤组的表达明显高于低级别组。2、OPN与MVD的表达关系密切,MMP-9与MVD的表达关系密切。在低级别组中,同时阳性表达OPN、MMP-9的MVD值显著高于只有一个阳性表达和都阴性表达的MVD值,提示OPN与MMP-9在胶质瘤的新生血管的产生中起重要作用,并可能有协同作用。3、OPN、MMP-9在肿瘤组织中的表达呈正相关,在胶质瘤发生发展中可能有协同作用。