阿拉尔市梨黑斑病的病原鉴定及室内药剂筛选

来源 :石河子大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xuesuifeng
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目的:近年因黑斑病的发生使库尔勒香梨生产遭受严重危害。本研究对引起库尔勒香梨的黑斑病病原进行了种类鉴定和药剂筛选,为黑斑病的防治提供依据。方法:在新疆阿拉尔市梨园随机采集表现明显黑斑症状的库尔勒香梨病果41个,采用常规组织分离法对病果进行真菌的分离与纯化;将分离获得的菌株通过无伤和有伤接种健康梨果和枣果进行致病性鉴定;同时对梨园附近发生的枣黑斑病采集感病枣花9株,通过同样的方法进行真菌的分离与致病性鉴定。通过菌落表型对表型差异明显的病原菌进行初步分类,筛选代表菌株。通过分生孢子的产生方式、分生孢子的大小、纵横隔膜数等形态特征对代表菌株进行形态学鉴定;基于过敏原基因(Alt-a1)、RNA聚合酶Ⅱ的第2大亚基基因(rpb2)、钙调蛋白基因(Cal)、翻译延长因子基因(tef1)、-微管蛋白基因(tub)和OPA2-1序列分别构建单基因和多基因联合系统进化树,对代表菌株进行系统发育分析。最终结合形态学与系统发育分析将病原菌鉴定到种。在PDA培养基中添加农药,通过农药对真菌生长的抑制率进行农药筛选。结果:1、菌株分离结果显示,从感病梨果的病组织中分离获得36株真菌菌株,根据菌落特征和分生孢子形态进行初步判定,链格孢34株,青霉菌2株,分别占分离菌株总数的94.4%和5.6%。从感病枣花中成功分离6株真菌菌株,全部为链格孢。2、对34株梨上分离到的链格孢菌株和6株枣链格孢菌株分别在库尔勒香梨和枣果上进行无伤和有伤接种。结果显示,梨黑斑病致病链格孢有伤接种3 d和无伤接种5~7 d均可在库尔勒香梨的接种部位引起与田间相似的黑褐色坏死病斑,并能在枣果上引起同样的黑褐色病斑;同样,枣链格孢也能通过无伤和有伤接种在库尔勒香梨上引起与田间相似的黑斑病症状。结果表明,梨黑斑病致病链格孢和枣黑斑病致病链格孢能够相互侵染,均是导致库尔勒香梨黑斑病的致病病原。3、根据培养形状的差异,选取P3、P8、P21、P26进行种类鉴定。P3和P8菌株的分生孢子梗具分支,分生孢子短链生,孢子链一般由10个以内孢子构成;P3菌株的支链较短,由1~4个孢子构成短分支,分生孢子平均大小为9.5×19.1μm,具1~3个横膈膜;P8菌株分生孢子大小平均为9.3×20.3μm,具2~5个横膈膜。P21和P26菌株形态相近,分生孢子长链生,一般由10个以上孢子构成,孢子链多不分支;分生孢子平均大小分别为12.7×25.9μm和11.0×27.4μm,具3~7个横膈膜。基于Alt-a1、rpb2、Cal、tef1、tub基因和OPA2-1序列对4个代表菌株分别进行单基因和多基因系统发育分析,再结合形态学特征,最终将P3菌株的种类鉴定为乔木链格孢(Alternaria arborescens)、P8菌株的种类鉴定为交链格孢(Alternaria alternata),P21和P26菌株的种类鉴定为细极链格孢(Alternaria tenuissima)。4、药剂筛选结果显示,25%咪鲜胺稀释100倍对链格孢抑菌效果最好,抑菌率为87.1%;其次为40%氟硅唑稀释8000倍,抑菌率为85.8%;32%苯丙?甲环唑稀释100倍对链格孢生长抑制率为83%;72%霜脲?锰锌抑菌效果最差,稀释150倍对链格孢抑制为69.6%。结论:引起库尔勒香梨黑斑病的病原菌种类是Alternaria arborescens、Alternaria alternata和Alternaria tenuissima;梨黑斑病致病链格孢和枣黑斑病致病链格孢互为库尔勒香梨黑斑病和枣黑斑病的致病病原。25%咪鲜胺和40%氟硅唑对梨黑斑病菌具有较好的抑菌效果。
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