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双峰驼是一种古老的物种,具有耐盐、耐饥渴、耐低气压、耐酷暑严寒等生物学特性。双峰驼喜欢采食盐碱含量高的食物,却不会引起血压升高,在采食一些有毒植物后不出现中毒现象等独特的生物学特性吸引着诸多学者浓厚的研究兴趣。细胞色素P450(CYP)酶系在动物内源性物质和外源性物质代谢中起着关键作用,而CYP3A酶是CYP酶系中含量最高的亚酶,且CYP3A酶参与50%以上的药物代谢。为探究双峰驼体内CYP3A酶活性,本试验借助探针药物法对双峰驼体内CYP3A酶活性进行研究。首先,建立高效液相色谱紫外检测法(high performance liquid chromatography-Ultra Violet,HPLC-UV)测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度的方法,为借助特异性探针药物法研究双峰驼CYP3A酶体内活性奠定方法学基础。采用色谱柱为Sigma C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为 V(乙腈):V(0.01MPBS 冲溶液)=40:60,流速为:0.5mL/min,柱温为30℃,检测波长为254nm。首先采用乙腈沉淀血浆样品蛋白质,离心处理,经过0.22 μm有机针孔滤膜过滤,取滤液10 μL进样检测。结果表明,咪达唑仑的保留时间为12.207 min,峰形良好,无杂峰干扰。并在0.39μg/mL～25μg/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.999,n=7)。高、中、低三个浓度的相对回收率分别为101.60%±1.96%、100.00%±0.64%和95.51%±1.28%。因此,所建立的测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度的HPLC紫外检测方法灵敏度高、稳定性好、分离完全、峰形良好。其次,通过研究CYP3A酶的特异性探针底物咪达唑仑在双峰驼体内的药代动力学特征和CYP3A酶特异性抑制剂伊曲康唑对底物药动学主要参数的影响,探究双峰驼CYP3A酶的体内活性。选取健康阿拉善双峰驼10峰,分为底物组和酶抑制剂+底物组。每组5峰,底物组按0.1 mg/kg给双峰驼肌肉注射咪达唑仑注射液后,分别于 0 min、5 min、15 min、30 min、1h、2 h、4 h、6 h、12 h 和 24 h,由颈静脉采集血液于抗凝管中,离心分离血浆,冷冻保存备用。酶抑制剂+底物组双峰驼连续4天按照0.1 mg/kg肌肉注射CYP3A酶特异性抑制剂伊曲康唑注射液,每天一次,并在末次给药2 h后,再按0.1mg/kg肌肉注射咪达唑仑注射液,分别于给药后第0 min、5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、12 h 和 24 h,由颈静脉采集血样,离心分离血浆,冷冻保存备用。按照已建立的高效液相色谱检测法测定各时间点血浆中咪达唑仑的动态浓度,并应用Phoenix WinNonLin 7.0软件按非房室模型拟合分析,计算药动学主参数,并进行统计学分析。双峰驼单剂量给予咪达唑仑后,药动学参数 T1/2为2.5±0.07h,Tmax为0.85±0.09h,Cmax 为 0.62±0.12μg/mL,AUC0-t为1.47±0.34h.μg/mL,Vd为259.17±41.29mL/kg,CL为 53.46±14.25mL/h/kg,MRT为3.71±0.16h。先给予伊曲康唑后,咪达唑仑的药动学参数T1/2为3.67±0.23 h,Tmax为 0.54±0.06h,Cm ax为0.8±0.06μg/mL,AUC0.t 为 2.15±0.15h.μg/mL,Vd 为152.09±22.49mL/kg,CL 为 34.38土5.13mL/h/kg,MRT 为 4.60±0.52h。由此可知,双峰驼CYP3A酶对咪达唑仑具有很强的降解活性,而且受到伊曲康唑的特异性抑制。因此,通过本试验成功建立了稳定、可靠、灵敏而专属性强的CYP3A酶特异性底物咪达唑仑的高效液相色谱定量检测法;首次借助CYP3A酶的特异性探针底物法研究了双峰驼CYP3A酶的体内活性,并探讨了 CYP3A酶特异性抑制剂伊曲康唑对咪达唑仑在双峰驼体内的药动学主要参数的影响,从而反映了酶抑制剂对双峰驼CYP3A酶体内活性的影响。该试验结果不仅填补了双峰驼CYP3A酶体内活性研究的空白,还为双峰驼合理用药和对有毒植物的降解代谢特性的深入研究奠定了一定基础。