EB病毒(Epstein-Barr virus)感染与多种癌症包括霍奇金淋巴瘤和鼻咽癌相关。潜伏膜蛋白1(latent membrane protein1,LMP1)是EB病毒编码的膜蛋白,对EB病毒致病机理和疾病表型尤为关键,是肿瘤免疫治疗的理想靶点。本论文体外合成LMP1胞外96-107 aa并免疫小鼠。三次免疫小鼠后得到的血清在ELISA测定中显示较高效价。以EBV~+B95-8,EBV~-BJAB和过表达LMP1的293T细胞为样本,通过流式细胞法和Western杂交法检测其结合全长及天然LMP1蛋白的能力,结果证明免疫后血清均无特异的结合能力,因此无法使用免疫小鼠法得到抗LMP1特异单抗。随后将LMP1胞外段与-Fc基因构建至真核表达载体pSegTag-hFc融合表达的并纯化蛋白,经生物素标记后作为抗原对大容量人源天然噬菌体Fab文库进行筛选。经体外四轮减量抗原筛选后,多克隆ELISA结果显示噬菌体Fab文库中特异性抗LMP1胞外段的Fab克隆得到有效富集。随机挑384个单克隆,单克隆ELISA结果表明其中14个人源Fab克隆对LMP1胞外段具有高于Fc抗原2倍的结合能力。测序并翻译成肽序列后分析结果显示此14个克隆均为有效Fab的克隆,其中有两对克隆插入VH和VL序列一致。抗原稀释结合实验发现这些Fab克隆对LMP1-Fc的结合随浓度呈线性变化,其中克隆10-B2和15-H10具有较强的抗原结合能力。Western blot确认除1-A11是结合Fc端的Fab克隆外,其他均为LMP1的结合克隆。Western Blot结果证实293T中过表达的LMP1或B95-8细胞中內源表达的全长LMP1可被6-C6,7-G9,10-B2和15-H10有效检测。流式细胞法证明克隆1A11,6-C6,7-G9,10-B2和15-H10能够染色EBV~+细胞系B95-8,克隆10-B2和15-H10能够染色EBV~+细胞系LCL,而对照EBV~-细胞系BJAB未见特异染色。免疫荧光染色及共聚焦显微镜观测到克隆15-H10可特异染色B95-8。综上所述,本研究分离得到了LPM1特异性Fab克隆6-C6,7-G9,10-B2和15-H10。这些克隆可为EB病毒诊断及过继性免疫治疗靶向EB病毒相关肿瘤提供材料。