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背景作为目前已知最重要的正性血管生成调节因子，血管内皮细胞生长因子（VEGF）可以刺激血管内皮细胞的增殖，增强血管的渗透性，有利于肿瘤的发生和转移。1971年Folkman首次提出肿瘤的血管生成(angiogenesis)这一观点。不久VEGF信号通路就被确定为抗肿瘤治疗的新靶点。人们对实体瘤中VEGF信号通路的研究比较深入，如细胞外信号调节激酶Raf/MEK/ERK信号通路，PI3K/AKT信号通路，p38MAPK信号通路，JNK/STAT信号通路，NF-κB信号通路，DLL4-Notch信号通路等。同样在白血病中也存在明显的血管新生现象，表现为骨髓微血管密度（MVD）的增高，并且伴有VEGF表达水平的升高。但是，白血病细胞VEGF表达分泌的机制，以及靶向VEGF调控在白血病细胞增殖分化中的作用至今没有明确。目的基于上述理论背景，本研究建立ATRA诱导急性早幼粒白血病细胞株HL-60细胞分化的模型，在该细胞模型中VEGF表达水平下降，在此基础上进一步探讨VEGF表达调控的关键分子机制，从肿瘤相关基因的转录因子出发，检测其与VEGF表达的关联性，筛选出调控VEGF表达的上游转录因子，探索新的基因靶点，拟为白血病的治疗开辟新的治疗道路。方法取对数生长期的HL-60细胞，加入1μMATRA，于37℃、5%CO2饱和湿度下培养96小时，Wright-Gimesa染色观察HL-60细胞形态，硝基四唑氮蓝（NBT）还原实验检测HL-60细胞分化，流式细胞术检测CD11b的表达和HL-60细胞周期，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测HL-60细胞增殖，免疫细胞化学法检测HL-60细胞VEGF、c-myc的表达，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CD11b、VEGF、HIF-1α、STAT3、c-myc、P53、VHL、COX-2、SP-1和AP-1mRNA的表达，蛋白质印记（Western blot）检测细胞VEGF、STAT3、c-myc的蛋白表达。RNA干扰（RNAi）检测STAT3、c-myc与VEGF的关系，染色质免疫共沉淀（ChIP）进一步验证c-myc与VEGF启动子的结合情况。测定结果用x±s表示，均数比较采用t检验，组间比较用单因素方差分析，以P<0.05为有统计学意义，P<0.01为有显著性差异。结果1μM ATRA作用96小时可显著抑制HL-60细胞的增殖，并出现明显的分化现象，倒置显微镜下观察到细胞明显向成熟粒细胞方向分化；免疫细胞化学法显示VEGF表达量明显下降；流式细胞术检测细胞周期，处于G0/G1期的比例高达77.31%；流式细胞术检测细胞表面标记CD11b表达水平明显升高（P<0.01）；NBT阳性率为82.59%（P<0.01）；RT-PCR检测VHL基因表达无明显变化（P>0.05），HIF-1α、P53、COX-2、SP-1和AP-1mRNA表达水平升高；RT-PCR及Western blot检测VEGF、STAT3和c-mycmRNA和蛋白表达水平均明显下降（P<0.05）；RNAi结果显示阻断c-myc基因的表达，VEGF基因的表达水平明显下降（P<0.05）；ChIP实验进一步验证c-myc与VEGF启动子的结合情况。结论在ATRA诱导HL-60细胞分化的模型中VEGF的表达水平随诱导分化的进程而下降，VEGF的下调可能与c-myc、STAT3具有显著相关性，而且c-myc可能结合于VEGF启动子区域，调控VEGF的表达。HIF-1α、P53、VHL、COX-2、SP-1和AP-1可能作为负调控因子参与VEGF的调控表达，也有可能在HL-60细胞分化的某些环节发挥更加重要的作用。