莱茵衣藻是一种典型的模式生物,其细胞一侧有两条等长的纤毛,具有细胞周期短、成活率高、生长速度快等优势,便于遗传分析。纤毛是广泛分布于真核生物细胞表面的一种保守器官,其结构或功能异常会引起纤毛病,包括肥胖、多囊肾病、视网膜变性、BBS综合征等。纤毛内运输系统(IFT)是一种将蛋白质复合体从基体到顶部双向运输的系统,影响着纤毛的组装、维持以及信号转导。BBS3b蛋白是莱茵衣藻BBS蛋白的一种,与IFT复合物有相互作用,其突变后会导致BBSome综合征,但是其具体功能还不清楚。目前人们还没有有效的方法来预防和治疗这些“纤毛病”,这在很大程度上是因为人们对于纤毛的形成、解聚以及“纤毛病”的发病机制在分子水平上还没有一个清晰的认识。为了开展更深入的研究,制备对应的抗体,在蛋白水平展开实验是不可或缺的。本课题制备了莱茵衣藻小G蛋白BBS3b的多克隆抗体。利用莱茵衣藻bbs3b基因的cDNA序列分别构建了带有GST和6×His标签的原核表达载体pGEX-2T-BBS3b和pET-28a(+)-BBS3b并转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,以12%SDS-PAGE鉴定。用纯化的GST-BBS3b融合蛋白免疫新西兰大白兔,采集第4次免疫后的血液并分离血清,利用间接ELISA法进行效价测定,将抗血清依次经过Protein A纯化和硝酸纤维素膜纯化,用Western blotting检测抗体特异性。结果显示,GST-BBS3b和6×His-BBS3b融合蛋白的分子量分别为46、20kDa。用ELISA的方法测定抗血清效价达到512000,Western blotting检测结果显示制备的多克隆抗体能够特异性识别莱茵衣藻BBS3b蛋白,为研究BBS3b在纤毛中的作用奠定了基础。