维生素D在2型糖尿病并发高血压中的作用及机制探讨

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目的:大血管并发症是2型糖尿病患者致残致死的主要原因,其发病机制尚不明确,治疗措施有限。维生素D与糖尿病关系的研究已成为热点问题。维生素D不仅是钙磷代谢的调节剂,尚参与多种细胞的增殖、分化和免疫功能的调控过程,并与多种肿瘤的发生与发展有明显相关。维生素D通过与维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)结合起作用,而机体的每个细胞和组织,包括脑、心脏、胰腺、皮肤和胃肠道等,均含有VDR。所以,维生素D与多种疾病有关。近年来一系列研究表明维生素D与糖尿病及其血管并发症的关系密切,但其关系尚无定论。成纤维细胞生长因子(Fibroblastgrowth factor-23,FGF23)是参与调节维生素D和磷酸盐代谢的重要体液调控因子,与心血管疾病有关,但在糖尿病及其血管并发症中FGF23与维生素D关系尚不明确。本研究通过检测并比较正常人、2型糖尿病无高血压并发症和2型糖尿病并高血压并发症患者血清25羟基维生素D3(25-HydroxyvitaminD3,25(OH)D3)和FGF23水平的变化趋势,从而探讨维生素D在2型糖尿病合并高血压中的作用;体外培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical veinendothelial cells,HUVECs),观察高糖对其内皮功能的影响及1,25二羟基维生素D3(1,25-Dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3)对其的保护作用,为进一步治疗糖尿病大血管病变提供理论依据。方法:包括两部分:1、维生素D在2型糖尿病并发高血压中的变化研究:①研究对象分组:选择我院内分泌科2010年9月至2011年1月住院的2型糖尿病合并高血压患者40例(DH组),2型糖尿病不高血压患者40例(DM组),以我院同期体检的40名性别和年龄匹配的健康人(NC组)为对照组,②所有病例记录患者的临床情况及实验室检查:肝肾功能、血脂、血糖、24小时微量白蛋白测定等资料。采集受检者清晨空腹抽取静脉血4ml至促凝管中,2h内于3000r/min离心10min,分离血清,储存于-20℃冰箱内保存待测。③酶联免疫吸附测定技术(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清25-OH-D3和FGF23浓度。④统计学处理:统计分析均使用SPSS16.0统计学软件,计量资料以x_±s表示,检验各组变量正态分布,非正态分布资料经对数转换后进行分析。三组间比较采用单向方差分析(one-wayANOVA)。指标间关系判定采用直线相关分析及多元线性回归分析,P0.05认为差异有统计学意义。2、维生素D在2型糖尿病并发高血压中的变化的作用机制的研究(体外实验):①体外培养HUVECs,细胞分组:首先分别用10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L浓度的高糖干预12小时、24小时、48小时,筛选出最佳高糖作用浓度和最佳作用时间,在此基础上进行维生素D干预分组:正常组(培养基中不含葡萄糖)、高糖组(培养基含30mmol/L葡萄糖)、维生素D甲组(培养基中含10-7mol/L1,25-(OH)2D3)、维生素D乙组(培养基中含10-8mol/L1,25-(OH)2D3)、维生素D丙组(培养基中含10-9mol/L1,25-(OH)2D3)、无水乙醇组(含与干预组等体积无水乙醇)、甘露醇组(培养基含30mmol/L的甘露醇,作为高糖组的渗透压对照)。②硝酸还原酶法检测细胞培养上清中NO。③ELISA法检FGF23、1,25-(OH)2D3、AngⅡ和肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)的浓度。④反转录酶聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR):检测各组细胞中维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)的mRNA和抗衰老基因(KLOTHO,KL) mRNA的表达。⑤统计学处理:应用SPSS16.0统计软件分析数据,数据均以均数±标准差(ˉx±s)表示,各组间比较用单因素方差分析,两两比较采用q检验,组内比较采用独立样本均数t检验,检验水准α=0.05,P<0.05表示有统计学意义。结果:1、维生素D在2型糖尿病并发高血压中的变化研究的结果:与NC组相比较,DM组的25-(OH)D3水平(31.96±2.13μg/L)低于NC组(33.53±2.53μg/L)(P0.05),DH组25-(OH)D3水平(30.82±2.83μg/L)较DM组更低(P0.01)。与NC组比较,DM组FGF23水平(1.80±0.09μg/L)高于NC组(1.14±0.09μg/L)(P0.01),且DH组FGF23水平(1.86±0.08μg/L)较DM组更高(P0.01)。多元线性回归分析提示,FGF23(β=-0.312,P<0.01)与25-(OH)D3浓度显著相关。2、维生素D在2型糖尿病并发高血压中的变化的作用机制的研究(体外实验)结果:与正常组比较,高糖组NO浓度(20.03±1.55μmol/L)较正常组降低(56.85±0.79μmol/L)(P<0.01),AngⅡ浓度(33.14±1.85ng/L)较正常组(25.63±1.68ng/L)升高(P<0.01),1,25-(OH)2D3浓度(30.77±0.82ng/L)较正常组(41.32±1.84ng/L)降低(P<0.01),TNF-α浓度(253.29±2.45ng/L)较正常组(221.06±2.43ng/L)升高(P<0.01),1,25-(OH)2D3干预可使这一效应部分逆转,其中干预甲组最为明显(P<0.01)。结论:1、2型糖尿病患者体内存在维生素D和FGF23浓度异常,血清25-OH-D3和FGF23在2型糖尿病及其合并的高血压的发病中有重要意义。2、体外实验证实活性维生素D对人脐静脉内皮细胞功能有改善作用。活性维生素D可能通过影响VDR的表达,血管活性物质NO、AngⅡ的比例改变,抗炎作用来改善血管内皮功能,进而可能对糖尿病并发高血压有保护作用。
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