雷帕霉素对PAN损伤足细胞的作用及其对p--P70S6K表达的影响

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:sisu16113
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目的:通过观察不同PAN浓度下,不同剂量的雷帕霉素对足细胞Nephrin及p-P70S6K表达的影响,探讨其对PAN损伤足细胞的保护作用及可能的机制。方法:(1)将同步化的足细胞分成4组:对照组及20、50、100μg/mlPAN组,对照组加入无血清RPMI1640培养基培养,其余三组分别加入终浓度为20、50、100μg/ml的PAN的无血清RPMI1640培养基培养。24h后收集细胞,Western blot法检测细胞Nephrin蛋白相对表达量。(2)将同步化的足细胞分成4组:模型对照组及10、100、1000ng/ml雷帕霉素组。所有细胞加入终浓度为50μg/ml的PAN的无血清RPMI1640培养液,培养24小时后弃去PAN培养液,模型对照组加入等量雷帕霉素溶解液,其余三组分别加入终浓度为10、100、1000ng/ml的雷帕霉素培养,24h及48h后, Western blot法检测细胞Nephrin蛋白相对表达量。(3)将同步化的足细胞分成3组:1)正常对照组:无血清的RPMI-1640培养液培养;2)模型对照组:终浓度为50μg/ml的PAN+无血清的RPMI-1640培养液;3)雷帕霉素组:终浓度为100ng/ml的雷帕霉素+终浓度为50μg/m的PAN+无血清的RPMI-1640培养液。3组细胞分别培养24h及48h,收集细胞,观察细胞形态、Western blot检测p-P70S6K蛋白相对表达量。结果:(1)PAN50、100μg/ml组与空白对照组相比,nephrin蛋白表达显著减少(P<0.05);PAN50μg/ml与PAN100μg/ml组相比,nephrin蛋白表达无统计学差异,与20μg/ml组相比,nephrin蛋白表达显著减少。(2)雷帕霉素100ng/ml组与10、1000ng/ml组相比,nephrin蛋白表达明显增加(P<0.05)。(3)与正常对照组、PAN模型组相比,雷帕霉素(100ng/ml)组作用PAN损伤模型24h后nephrin及p-P70S6K蛋白表达无明显变化;作用48h后,雷帕霉素(100ng/ml)组与PAN模型组相比,nephrin蛋白表达显著增加,p-P70S6K蛋白表达较对照组、PAN模型组显著减少。结论: PAN50μg/ml的剂量即为体外PAN损伤足细胞模型的最佳浓度。100ng/ml的雷帕霉素对PAN导致的足细胞损伤有很好的保护作用。雷帕霉素的这一保护作用可能通过抑制mTOR实现的,但其具体机制仍需进一步研究。
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