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本文由两部分组成,通过两篇文献综述回顾了白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)具有自我更新和无限增殖潜能,是造成白血病发生发展的根源。而且LSC处于静止期,对化疗药物不敏感,易产生对多种化疗药物的交叉耐药,一般细胞周期化疗药物很难对其发挥杀伤效果。加之LSC集中于药物难以达到的骨髓区域以及具有天然耐药特性,正好逃逸了抗癌药物的攻击,为急性白血病复发潜伏了祸根。当多数白血病患者处于临床完全缓解状态时,体内仍残留包括LSC在内的微小残留病灶会重新活跃进入细胞分裂周期,并很快自我更新,无限增殖,造成急性白血病复发。临床观察还发现,部分难治性急性白血病患者一旦使用化疗既会出现严重的骨髓抑制,但停药后外周血或骨髓却很快显现大量的白血病细胞,且具有耐药相关蛋白高表达特征,支持LSC具有高度增殖潜能与多药耐药的生物学特征。因此针对LSC源头上的靶向干预治疗是克服白血病多药耐药最有效途径。我们前期研究发现,复方浙贝颗粒联合化疗能够提高难治性急性白血病患者临床缓解率,效应机制与诱导细胞凋亡、降低膜耐药蛋白高表达、调节酶异常变化相关,但均以白血病细胞为靶标,是否能针对LSC起到逆转耐药效应缺乏深入研究。临床研究主要为：1.研究目的通过观察复方浙贝颗粒联合化疗对难治性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者骨髓LSC表面分子标志物的影响及难治性AML患者白血病细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路和NF-κB信号通路中相关分子标记物(PI3K、mTOR、PTEN、 NF-κB)与骨髓周围微环境相互作用的细胞表面标记物CD44表达变化,试图明确复方浙贝颗粒逆转多药耐药效应靶点。2.研究方法全部病例资料来自北京中医药大学东直门医院血液肿瘤科,北京大学人民医院血液科,廊坊市中医医院血液科于2011年12月至2013年8月观察的难治性AML患者。治疗采用化疗方案有HAE, MA, CAG, AA, EA, FLAG等,复方浙贝颗粒(浙贝母12克,川芎9克,防已9克)由北京康仁堂药业有限公司制成中药配方颗粒,于化疗前3天开始服用复方浙贝颗粒,每次1袋,每日2次,共服用14天,21天为一疗程。以流式细胞术分别检测骨髓有核细胞中LSC表面分子标志物(CD34+CD123+、 CD33+CD123+)细胞表达比例。有30例患者完成治疗前后对照,分别检测了2次LSC表达比例；另外23例患者仅检测了1次LSC表达比例。20例次在北京中医药大学东直门医院血液肿瘤科住院的难治性AML患者行骨髓活检术采集组织标本,以免疫组化技术检测了CD44、PI3K、mTOR、PTEN、NF-κB表达情况。3.研究结果①难治AML中CD34+与CD33+CD123+细胞比例分别为11.78%、12.86%,两者相关性分析显示相关系数为0.953,两者具有明显相关性(p<0.001)。②按诊疗标准分类将难治性AML分为两组,其中处于缓解状态时患者的LSC表达比例分别为0.66%,0.92%,较处于复发状态时LSC比例(20.73%,22.47%)明显降低,差异具有统计学意义(p<0.001)。③30例完成前后治疗对照的难治性AML患者治疗后LSC表面分子标志物细胞表达比例(5.49%,5.94%)较治疗前明显降低(17.05%,17.71%),差异有统计学意义(p<0.05)。其中25例处于复发状态时完成治疗前后对照的患者进一步分析发现,治疗后LSC比例(6.82%,7.39%)也较治疗前LSC比例(21.74%,22.48%)明显降低,差异有统计学意义(p<0.01)。治疗后达到完全缓解有10例患者(有效率40%),且LSC表面分子标志物细胞表达比例分别为1.50%,1.65%,较未缓解患者明显下降(11.65%,12.61%),差异具有统计学意义(p<0.01)。④20例取骨髓活检患者中9例处于完全缓解的白血病细胞相关分子标记物CD44、PI3K、mTOR.PTEN.NF-κB阳性细胞表达率分别为22.2%、0%、33.3%、33.3%、77.8%,与11例未缓解的63.6%、0%、18.2%、63.6%、90.9%相比,CD44表达差异有统计学意义(p<0.05),阳性表达强度也提示CD44表达在两组间有统计学差异。完全缓解的白血病细胞相关分子标记物CD44.PI3K.mTOR.PTEN.NFκB平均光密度分别为441.78、217.28、393.58、91.16、642.66,与未缓解的840.06、316.21、223.00、292.51、775.35相比,CD44表达差异有统计学意义(p<0.05)。4.研究结论①CD34’CD123+与CD33+CD123+细胞具有显著相关,可以用来定位LSC。②LSC比例可以反映急性白血病患者是否处于持续缓解状态。③复方浙贝颗粒是通过降低LSC表面分子标记物CD123、CD33表达比例,提高了难治性AML化疗缓解率。④白血病细胞中CD44高表达可作为难治性AML预后判定的重要参考指标,PI3K/Akt/mTOR信号通路和NF-κB信号通路在白血病细胞中的作用需要进一步研究。