葡萄离体种质保存及其蛋白质组学研究

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本研究以葡萄(Vitis vinifera)为试验材料,利用组织培养的技术针对福建省的葡萄种质资源进行收集培养得到葡萄试管苗,并进行离体保存,探索最佳的离体保存条件。本论文主要进行了以下几方面的研究:①葡萄试管苗离体再生体系的建立,②葡萄试管苗离体保存的研究,③葡萄试管苗离体保存过程中蛋白质组学的研究。具体如下:1葡萄试管苗离体再生体系的建立试验中以葡萄单芽茎段为外植体材料,最佳的取材时间是春季4月份新枝刚抽出时。以美人指单芽茎段为材料对比不同的初代培养基组合,结果表明以不添加细胞分裂素,无机盐浓度较低的GS+0.2mg/L IAA的培养基为好。同一培养基对不同葡萄进行初代培养,结果表明不同基因型对芽的诱导率影响起着重要作用。不同基本培养基,不同6-BA和IAA浓度的正交设计增殖培养基的筛选中以MS(1/2N)+1mg/L6-BA+0.1mg/L IAA最佳,增殖系数达到了6.8。2葡萄试管苗离体保存试验以美人指试管苗为材料研究不同浓度多效唑和不同浓度甘露醇对试管苗离体保存影响的单因素试验。结果表明多效唑和甘露醇都能够有效地限制试管苗的生长,最佳的多效唑浓度为2mg/L,最佳的甘露醇浓度是15g/L。以GS+2mg/L多效唑为培养基接种10个不同葡萄品种试管苗,结果表明此浓度多效唑对多数基因型葡萄都有很好的限制生长作用。另外,以白砂糖、甘露醇、多效唑为因子设计了三因素三水平的正交试验,结果表明最佳的组合是:GS+30g/L白砂糖+2.5mg/L多效唑+14g/L甘露醇。3葡萄离体保存过程中蛋白质组学的研究①葡萄试管苗离体保存过程中蛋白质的双向电泳将同一株系的美人指试管苗接种在试验组:GS+2mg/L多效唑+30g/L蔗糖+6g/L琼脂,对照组:GS+30g/L蔗糖+6g/L琼脂;分别在10天、20天、30天、40天时取材,蛋白提取、定量后进行双向电泳。对得到的电泳图谱利用Image master2D Platinum6.0软件进行分析,试验组得到的蛋白点个数分别为:356、368、286、174,对照组得到的蛋白点个数分别为:261、295、183、154。10天时,对照组中特异表达的蛋白质比试验组多80个,而在后面阶段试验组特异表达的蛋白质都要比对照组中多。从分子量的分布情况来看大部分蛋白的分子量为30-45KDa之间。②葡萄试管苗离体保存过程中相关蛋白的质谱鉴定及功能分析试验选取葡萄试管苗离体保存过程差异表达的49个蛋白点进行了质谱鉴定。最终,成功鉴定46个,占93.9%。葡萄基因组测序在2007年已经完成,因此质谱鉴定成功蛋白中有很多是预测蛋白或假定蛋白,占74%。蛋白的功能分类表明差异蛋白主要集中在了与光合作用有关的细胞组分中。从鉴定蛋白所参与的生物过程来看主要集中在氧化还原,CO2的固定,碳水化合物代谢过程,防御反应,应对生物刺激等方面。从分子功能角度来看鉴定成功蛋白主要的功能集中在催化活性,二磷酸核酮酶活性,氧化酶活性,核酸结合活性等。在已知蛋白中多数与抗氧化作用和光合作用有关。表明多效唑能够增强葡萄试管苗的抗性。
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