基于ITS2序列构建10种常见中药材种子DNA条形码鉴定体系

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我国中药材种类繁多,资源丰富,但是中药材资源的过度开发致使大面积植被被毁,野生资源逐渐减少,中药材资源正面临着可持续发展困难的危机。因此,对中药材进行人工栽培以保持物种的延续性,并满足市场需求,将是发展中药产业的一个重要环节。企业投资建设中药材种植基地频频兴起,中药材种植面积的扩大,必然需要优质且基原正确的种源,其在中药材种植过程中起着举足轻重的作用。DNA条形码技术(DNA Barcoding)是近几年来国际物种鉴定领域迅速发展起来的新技术,该技术具有便捷、准确、科学性强、可重复性高的特点。其中ITS2序列由于序列短、易扩增、鉴定能力佳而成为了研究热点。因此本文基于ITS2序列构建了中药材种子的鉴定体系,对10种常见的中药材种子进行了鉴定效果的研究。  本文以国家药用植物种质资源库提供的柴胡、秦艽、枸杞子、党参、甘草、吴茱萸、红花、牛膝、板蓝根、当归这10种中药材标准种子为研究对象,采用基于ITS2序列构建的中药材种子鉴定体系对其进行分子鉴定。该鉴定体系主要包括:建立种子取样法、DNA提取方法;PCR扩增DNA条形码片段(ITS2序列);鉴定“三步法”(首先进行单倍型比较、其次构建NJ树、最后通过中药材DNA条形码分子鉴定系统网站进行鉴定)。运用上述的鉴定体系,本研究对该10种中药材105份种子样品提取获得的315条序列进行了鉴定,结果表明:所有种子样品都成功提取出DNA并获得ITS2序列,且都可鉴定出对应物种基原。而对于类似甘草、党参这类基原之间较难进行鉴别的药材,将其与其他物种成功区分开的研究思路是可以接受的,此结论不但达到本研究构建中药材种子鉴定体系的目的,也因此说明了该鉴定体系具有一定的灵活性与兼容性。最终成功验证了该鉴定体系的可行性,并且为这10种中药材种植基地种子的真伪鉴定提供依据。  综上所述,利用DNA条形码技术可以为鉴定中药材种子提供强有力的科技支撑。中药材种子DNA条形码鉴定体系具有易于操作和标准性强的特点,为药材种子选取,引种驯化,生产流通及出口等环节中的物种鉴定提供保障。
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