水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)是纤细病毒属的代表种,近年来,由其引起的水稻条纹叶枯病在我国多次爆发流行,严重危害我国的水稻生产,造成了巨大的经济损失。RSV是一种具有双义编码特征的多组分RNA病毒,其基因组由4种单链RNA(single-stranded RNA,ssRNA)组成,按照大小依次命名为RNA1,RNA2,RNA3和RNA4,RSV共编码7个蛋白,即依赖于RNA的RNA聚合酶(RdRp)、NS2、NSvc2、CP、NS3、SP和NSvc4。提取RSV侵染的水稻病叶的总RNA,经RT-PCR(reverse transcription PCR)扩增,获得C端融合有Strep标签的RSV基因NS2、NSvc2-N、CP、SP和NSvc4,将所获得的基因分别克隆到载体pMD-18T上,得到重组子pMD-NS2、pMD-NSvc2-N、pMD-CP、pMD-SP和pMD-NSvc4,经酶切和测序鉴定正确后,将所得到的重组质粒和杆状病毒转移载体pFastBac1分别用限制性内切酶BamHⅠ/ KpnⅠ进行双酶切,连接反应后得到重组转移质粒pFB-NS2、pFB-NSvc2-N、pFB-CP、pFB-SP和pFB-NSvc4,序列测定后表明目的基因准确地插入到载体pFastBac1上。然后,将所获得的重组转移质粒分别转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,以获得重组bacmid DNA,即rbpFB-NS2、rbpFB-NSvc2-N、rbpFB-CP、rbpFB-SP和rbpFB-NSvc4。将获得的重组bacmid DNA分别转染Sf9昆虫细胞,72h后收集细胞,通过Western blotting检测目的蛋白的表达情况,并通过免疫荧光实验观察目的蛋白在Sf9细胞中的亚细胞定位。重组杆状病毒rbpFB-NS2侵染的Sf9昆虫细胞,绿色荧光主要分布在细胞膜;重组杆状病毒rbpFB-NSvc2-N侵染的Sf9昆虫细胞,绿色荧光主要以囊泡状的形式存在于细胞质中;重组杆状病毒rbpFB-SP侵染的Sf9昆虫细胞,绿色荧光分布在整个细胞质中;重组杆状病毒rbpFB-NSvc4侵染的Sf9昆虫细胞,绿色荧光主要以丝状形式定位在细胞周质中;重组杆状病毒rbpFB-CP侵染的Sf9昆虫细胞,绿色荧光主要以不规则的点状结构分布于细胞质中。细胞是生命形式的基本组成单位,而蛋白质是生命活动的直接体现者。由于细胞被划分为不同的分区,所以成熟的蛋白只有在特定的细胞部位才能够发挥其正常的生物学功能,蛋白质亚细胞定位方面的信息能够强烈暗示其生物学功能,因此对蛋白质进行亚细胞定位研究是十分有必要的,它不仅可以帮助我们推断蛋白质的生物学功能,同时也能够对蛋白质其他方面的研究,如蛋白质间的相互作用等提供必要的信息。