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本实验以黄芪硒多糖对人肝癌HepG-2细胞的作用为研究对象,探究了其作用的机制。首先实验通过MTT法来测定黄芪硒多糖对于人肝癌HepG-2细胞增殖作用的影响,计算IC50值。结果表明,黄芪硒多糖对于HepG-2细胞的增殖具有抑制作用,并得IC50值为18.01μg/ml。利用倒置显微镜观察黄芪硒多糖作用48h小时后的细胞形态。观察结果发现,阴性对照组HepG-2细胞排列紧密,数量多,细胞形态饱满,无破损;阳性对照组HepG-2细胞数量极少,细胞已破损且基本无细胞形态;给药组随着给药剂量的增加,HepG-2细胞之间的间隙越来越大,细胞数量逐渐减少,细胞变圆变亮,贴壁细胞越来越少,有些细胞甚至破损。荧光显微镜下观察到,经过Hoechst33258染色,阴性对照组的细胞核被染成大小均匀的蓝色,细胞排列紧密,数量多,无破损,无凋亡小体出现;阳性对照组细胞核固缩变形,细胞间隙很大,细胞破碎,出现凋亡小体;给药组随着黄芪硒多糖给药浓度的升高,HepG-2细胞的细胞核固缩现象越来越明显,有的甚至缩成蓝色亮点,细胞间隙变大,细胞变形越来越明显。黄芪硒多糖给药48h后,通过流式细胞仪检测碘化丙啶单染后的HepG-2细胞,得出结果各组凋亡率分别为:黄芪硒多糖1Oμg/ml组(14.27±1.07)%,黄芪硒多糖20μg/ml组(24.70±0.84)%,黄芪硒多糖40μg/ml组(5.64±0.79)%,各组与阴性对照组相比P<0.01,具有统计学意义,说明凋亡峰随给药剂量的增加而升高。以上实验说明黄芪硒多糖能够抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,其原因与细胞凋亡途径有关。接着利用激光共聚焦检测黄芪硒多糖作用48h后细胞内钙离子荧光强度的变化,结果为:黄芪硒多糖3.75μg/ml组8.58±0.64,黄芪硒多糖7.5μg/ml组9.97±0.80,黄芪硒多糖15μg/ml组15.77±1.31(各组与阴性对照组相比P<0.01,具有统计学意义)。利用激光共聚焦检测黄芪硒多糖作用48h后线粒体膜电位变化,结果为:黄芪硒多糖3.75μg/ml组31.26±1.54,黄芪硒多糖7.5μg/ml组23.62±1.57,黄芪硒多糖15μg/ml组9.28±0.64(各组与阴性对照组相比P<0.01,具有统计学意义)。激光共聚焦检测黄芪硒多糖作用48h后细胞内活性氧含量的变化,结果为:黄芪硒多糖3.75μg/ml组3.44±0.23,黄芪硒多糖7.5μg/ml组4.82±0.58,黄芪硒多糖15μg/ml组8.43±1.17(各组与阴性对照组相比P<0.01,具有统计学意义)。上述结果说明,黄芪硒多糖作用于人肝癌HepG-2细胞后,导致HepG-2细胞内钙离子浓度升高,线粒体膜电位降低,活性氧含量增加,致使线粒体膜转换孔开放,质子和水分子大量进入线粒体内,造成线粒体破裂,造成了细胞凋亡。因此,本论文通过实验说明黄芪硒多糖对于人肝癌HepG-2细胞的增值具有抑制作用,其机理是通过线粒体途径来引发HepG-2细胞凋亡。