转基因家蚕表达药用蛋白的研究

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hIL-28A是2003年美国科学家Kotenko和Sheppard等共同发现的一种新型白细胞介素,可发挥类似Ⅰ型干扰素的抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能;人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granucyto-macrophage colony-stimulating factor,hGM-CSF)是一种重要的具有免疫调节功能的糖蛋白,在造血调控和免疫调节方面具有重要作用,其临床应用价值很高。   为了探讨非转座子载体介导转基因家蚕表达外源基因的可能性,本研究采用精子介导法将构建的重组载体 pIZT/V5-His-hIL-28A导入家蚕卵中,通过绿色荧光筛选并结合 PCR、DNA杂交等分子鉴定,证实获得了转基因家蚕;Western blotting结果显示转基因家蚕表达重组 hIL-28A的分子量为25 kDa,EIASA检测结果显示,hIL-28A在 G3代转基因蚕、后部丝腺、脂肪组织冻干粉中的含量分别为0.198、0.320和0.238 ng/g。表明通过非转座子载体介导可以将外源基因导入家蚕基因组,并实现外源基因的表达。   另外,为了研究转基因家蚕的遗传稳定性、所表达蛋白的活性及口服给药后效果,将本研究室先期制作的转 hGM-CSF基因蚕(G4代)饲养传代至 G12代,取每代转基因家蚕基因组进行 PCR扩增,均能扩增出 gfp、neo和 gm-csf; ELISA检测结果显示,hGM-CSF蛋白在G12代转基因家蚕后部丝腺表达量为20.8 ng/g冻干粉(G3代表达量为5.15 ng/g冻干粉);将丝腺冻干粉溶解液加入到K562细胞培养液1640中,培养细胞,利用 MTT法检测K562细胞数目,结果显示,能促进K562细胞数目的生长;同时将转基因蚕后部丝腺研磨液通过灌胃方式给药,能有效促进白细胞减少模型小鼠白细胞的生长。由此表明,转 hGM-CSF基因家蚕具有一定的遗传稳定性,家蚕体内表达的 hGM-CSF蛋白具有生物功能,并且可以通过口服方式给药,这为研究利用转基因家蚕表达口服化蛋白药物提供了依据。
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