【摘 要】
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实验目的:建立一种快速、简单、敏感、实用的方法以鉴别NDV强弱毒株.方法:在裂解位点两测设计一对均为20个碱基的寡聚核苷酸引物,引物1的5端被生物素标记.按照Aus/32强毒株F
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实验目的:建立一种快速、简单、敏感、实用的方法以鉴别NDV强弱毒株.方法:在裂解位点两测设计一对均为20个碱基的寡聚核苷酸引物,引物1的5端被生物素标记.按照Aus/32强毒株F基因裂解区域,设计24个碱基的寡核苷酸探针,并对之进行5端地高辛标记.对提取的NDV RNA进行RT-PCR反应后,把扩增产物加入到链霉亲和素包被好的微孔中,则生物素化的扩增产物变性,洗去非生物素化的单链.微孔中加入地高辛标记的探针杂交后,加入抗-地高辛-碱性磷酸酶,洗涤后加入碱性磷酸酶底物pNPP显色,于酶标仪上读取吸光度.结论:所建立的方法简便、快速、敏感、实用,优化PCR参数后可作为NDV疾病诊断、口岸检疫的常规方法.结合PCR电泳结果和最终杂交结果不仅可确定样本中是否含有NDV中、强毒株,而且可以对样本中是否有NDV弱毒株作出比较准确的判断.
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