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【目的】建立一种用于移植后m细胞系列嵌合体定量分析的的方法——基于SNP基因分型的实时荧光定量PCR定量技术,初步探讨该技术在检测移植后后血细胞植入状态中的应用。【方法】筛选了分别来自于5条不同染色体的7个特异性SNP位点,合成相应的引物和探针;随机抽取10例无关健康人模拟供受者,用免疫磁珠分选技术分离CD3+T淋巴细胞,利片Taqman探针建立实时荧光定量PCR法,对模拟血细胞嵌合体进行检测,用以评价本方案的可行性和准确性。最后分别对3例异基因造血干细胞移植后病例的外周血样进行嵌合度分析。【结果】1.免疫磁珠系统分选血细胞。2.SNP位点选择:从dbSNP数据库中筛选了7个SNP位点,这7个SNP位点包括三种碱基替换类型,其中3个C/T,3个A/G,1个T/G。在中国人群中基因频率介于0.3～0.8之间,且分布于不同染色体上。3.基于SNP分型的定量方法的建立:使用紫外分光光度计测定样本DNA浓度。我们制作了rs4245位点C等位基因的标准曲线,阴、阳性模板经实时PCR扩增后,操作软件输出标准曲线:y=-3.5976x+38.327,扩增效率为0.897,R2=0.9969。说明:该标准曲线线性关系好,灵敏度不低于0.1%。4.临床标本分析:用免疫磁珠分选CD3+T淋巴细胞,经流式细胞仪分析细胞纯度达97%,扩增该嵌合体样本(供者基因型:TT,受体基因型:CC),得到CT均值为21.23代入上述rs4245的标准曲线,根据输出结果以及DNA总量计算得到嵌合度为16.23%。【结论】采用免疫磁珠分选系统,可以高效快捷地进行血细胞分选。实时荧光定量SNP—PCR检测方法整体操作简便,经济省时,且具有更灵敏、更准确的优点,是异基因造血干细胞移植后嵌合体检测的更为有效的方法。