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垂体特异性转录因子1(POU1F1,原称Pit-l)基因是重要的组织特异性转录因子,同时是调控垂体GH、PRL、TSH-β亚基转录的重要反式因子,对动物早期发育和相关基因的启动表达起重要的调控作用,是与生长相关的候选基因之一,也是研究动物生长机制的重要基因之一。本实验克隆了猪POU1F1基因5’侧翼启动子区域序列,并对该区域不同猪种间多态分布、多态性与生长性能的关联进行了分析。1猪POU1F1基因启动子区域克隆及序列分析本实验利用染色体步移技术,从长白猪基因组中首次克隆到了共约2.6kb的POU1F1基因5’侧翼区序列,结果提交Genbank(序列号:EU924264)。利用相关软件对所得结果进行了序列分析和物种间POU1F1基因5’侧翼区序列比对及进化树构建。结果表明所克隆的片段中含典型的TATA盒(-57)和类CAAT盒序列(-87)。序列比对结果表明,不同物种POU1F1基因的同源序列主要集中在转录起始点上游-150bp至-1000bp区域。转录起始点上游-150bp区域保守性较强,可能是启动子的核心序列。同时,本实验使用Vista中的MLAGAN程序构建的系统进化树反应了物种间进化关系。2不同猪种POU1F1基因5’侧翼启动子区域多态性比较本实验利用香猪基因组克隆了约1.5kb的POU1F1基因5’侧翼区序列,与长白猪该段序列比较,发现5处突变位点,包括4处碱基突变和1处ggagtg短序列(-869bp处)的缺失或插入位点。利用PCR-RFLP技术,使用内切酶Hpy188 I,研究比较了长白猪、约克夏猪、杜洛克猪、苏姜猪、藏猪、荣昌猪、二花脸猪、梅山猪等共8个猪种的POU1F1基因5’侧翼区序列ggagtg缺失或插入位点突变(-869bp处)分布情况。卡方检验结果显示,所有猪种该位点基因频率分布均符合Hardy-Weiberg平衡。猪种间多态分布存在差异:其中,外来猪种长白猪、约克夏猪和杜洛克猪群体中以AA基因型为主,存在少量AB基因型杂合子个体,未发现有纯合BB基因型个体存在,在杜洛克猪群体中仅发现AA基因型纯合子;在地方猪种二花脸猪、梅山猪、藏猪、荣昌猪和苏姜猪群体中AA、AB、BB三种基因型均存在。3苏姜猪POU1F1基因5’侧翼区域序列多态性与其生长性状关联该多态位点与苏姜猪生产性能关联分析表明:在公母畜中,AA基因型的体长、胸围显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于AB基因型、BB基因型,即AA>AB、AA>BB,而AB基因型的体长、胸围与BB基因型的差异不显著(P>0.05);AA基因型的体重极显著(P<0.01)高于AB基因型,AB基因型的体重显著(P<0.05)高于BB基因型,即AA>AB>BB;在背膘厚方面,AA基因型、AB基因型、BB基因型背膘厚的差异均不显著(P>0.05)。在身高方面,公母畜存在差异,母畜差异显著,公畜不显著。因此,初步判定AA基因型为优势基因型。