复方壳多糖人工皮肤抗菌能力的初步实验研究

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理想的人工皮肤应具有抵御微生物侵袭的能力,本实验应用金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白念珠菌,以复方胶原凝胶人工真皮为对照,检测复方壳多糖人工真皮对各菌的体外抑菌效果,并用金黄色葡萄球菌局部涂抹皮肤全层缺损创面,制作SD大鼠污染创面模型,以复方壳多糖人工皮肤覆盖为实验组,复方胶原凝胶人工皮肤作对照,空白对照组创面无覆盖,通过观察三组大鼠一般情况、创面局部、血常规、细菌学检查、组织学观察、免疫组化等项目,证明了复方壳多糖人工皮肤与复方胶原凝胶人工皮肤相比,有更强的抗感染和促进创面愈合的作用,为复方壳多糖人工皮肤应用于临床尤其是用于烧伤、慢性溃疡等所致感染创面的治疗提供实验依据。方法:按我科已有方法制备人工皮肤后,在涂抹四种菌(金葡菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白念珠菌)的普通马血琼脂平板上,各滴加50ul复方壳多糖人工真皮或复方胶原凝胶人工真皮,每板加样两个点,每种菌三个平板,对比两组的抑菌环大小,进行统计学分析。将大鼠全层皮肤缺损创面涂抹金葡菌制作污染创面动物模型后,实验组覆盖复合壳多糖人工皮肤,对照组覆盖复方胶原凝胶人工皮肤,空白对照组不加覆盖,观察大鼠一般情况、创面局部、血常规、细菌学检查、组织学观察等项目,证明复合壳多糖人工皮肤的体外抗菌和在体抗感染、促进创面愈合的特性。结果:1. 体外抑菌试验结果:⑴复方壳多糖人工真皮对金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923体外具有抑菌效果,抑菌环为30.70±1.23mm,显著大于复方胶原凝胶人工真皮,抑菌环为28.67±0.91 mm,P<0.01, 有显著统计学意义。⑵复方壳多糖人工真皮对大肠埃希菌ATCC25922体外具有抑菌效果,抑菌环为12.47±1.43mm,大于复方胶原凝胶人工真皮,抑菌环为9.74±1.44mm,P<0.05,有统计学意义。⑶复方壳多糖人工真皮对铜绿假单胞菌标准菌株ATCC27853体外具有抑菌效果,抑菌环为10.42±2.89mm,复方胶原凝胶人工真皮对该菌无体外抑菌作用,P=0,两组有显著统计学差异。⑷复方壳多糖人工真皮和复方胶原凝胶人工真皮对白念珠菌ATCC10231均未见抑菌环。2. 在体移植SD大鼠金黄色葡萄球菌污染创面结果:⑴复方壳多糖人工皮肤组和复方胶原凝胶人工皮肤组大鼠的精神、活动度、反应力、食欲与健康大鼠相差不大,未<WP=8>加任何覆盖的空白对照组大鼠精神萎靡、活动度和反应力显著降低、竖毛、体重不增长、食欲下降。⑵24小时后,痂下组织细菌培养,复方壳多糖人工皮肤组痂下细菌量(8.09±2.51)×104CFU/g组织,复方胶原凝胶人工皮肤组(5.91±2.51)×105CFU/g组织,空白对照组为(5.55±2.18)×107CFU/g组织。⑶移植污染创面后3、7、14天取创周皮肤标本,HE染色,光镜下可见,实验组炎症反应轻,7天后肉芽增生明显,14天后基本愈合。对照组有小脓肿形成,炎症较实验组重。空白对照组3、7天后可见大量炎性细胞浸润,有出血、坏死、渗出,14天后可见组织坏死变性,皮下脓肿形成。⑷移植污染创面后7天取创周皮肤标本,肌动蛋白抗体免疫组化可见实验组基底细胞和纤维母细胞染色强阳性,对照组阳性,空白对照组阳性染色很少。结论:复方壳多糖人工皮肤具有体外抑菌和在体抗菌、抗感染、促进创面愈合的作用,效果优于复方胶原凝胶人工皮肤。
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