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重组人成纤维细胞生长因子10(Recombinant human fibroblast growth factor10,rh FGF-10)被广泛应用于皮肤损伤修复,同时其也有促进毛发生长的作用。然而,其不稳定性、透皮吸收效果差等缺点限制了其临床应用。因此本研究主要针对其不足之处,利用基因工程技术使rh FGF-10基因与油体蛋白基因oleosin在红花中融合表达oleosin-rh FGF-10蛋白,通过融合表达对rh FGF进行结构修饰使oleosin-rh FGF-10能克服传统rh FGF-10的不足之处,并对其相关药理学活性进行实验探究。转基因红花种植后待长出6-8片新叶,初步进行0.1%Basta抗性筛选,选择具有抗性的株系对其基因组进行PCR鉴定和Southern blot鉴定,待红花种子成熟后从种子中提取总油体蛋白,SDS-PAGE和Western blotting鉴定转基因红花种子中是否能成功表达出目的蛋白oleosin-rh FGF-10蛋白。将oleosin-rh FGF-10进行抗胰蛋白酶实验,经SDS-PAGE电泳和Western blotting来验证目的蛋白抗蛋白酶水解能力的强弱。随后进行小鼠在体的透皮吸收实验,使用免疫组化染色和Western blotting来评价oleosin-rh FGF-10的透皮吸收效果。利用小鼠全层皮肤切除创伤实验和促毛发生长实验用来评价oleosin-rh FGF-10对创伤修复和毛发生长的药理学活性。经相关药理学实验研究结果如下:(1)转基因红花基因组PCR检测为阳性,Southern blot证明了转基因红花外源基因在红花中的拷贝数为1。SDS-PAGE和Western blotting检测在45k Da左右出现目的蛋白oleosin-rh FGF-10蛋白的条带,符合预期目的蛋白大小。(2)抗胰蛋白酶水解实验中,oleosin-rhFGF-10蛋白条带能清晰的显现,条带位置和大小无明显的改变。相反,rh FGF-10条带由于在蛋白酶的水解作用下使目的蛋白水解,其分子量变小,条带强度减弱甚至消失。(3)Oleosin-rhFGF-10透皮吸收实验中,免疫组化染色结果显示oleosin-rhFGF-10组皮下组织出现大量阳性蛋白,目的蛋白在皮肤中吸收速率快。在oleosin-rh FGF-10组中,给药后的30min目的蛋白吸收达到最大值,而rh FGF-10组吸收速率慢,给药后30min目的蛋白在皮肤中才显著吸收,至给药后45min,目的蛋白吸收达到最大量,但由于其不稳定行,给药60min后其在体的含量有所下降。(4)在小鼠皮肤创伤实验中,给予oleosin-rh FGF-10和rh FGF-10治疗都能加快创面愈合和促进皮下组织的再生作用,在给药的第10天,oleosin-rh FGF-10治疗创面愈合率比rh FGF-10高(P<0.05),经过组织病理切片观察发现,oleosin-rh FGF-10组从皮下组织再生上,皮肤结构完整性上,皮下胶原重构上和表皮再生都要比其他三组效果好,说明oleosin-rh FGF-10具有更好的促进创伤修复的作用。(5)在促毛发生长实验上,oleosin-rhFGF-10相比与rhFGF-10组,WT组和PBS组具有更好的促进毛发的再生,其再生毛发数量明显多于其他三组(P<0.05,P<0.001,P<0.001),进一步的从分子水平揭示oleosin-rh FGF-10能促进角质蛋白14的大量表达,从而促进毛发更好的生长。