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桃树(Prunuspersica(L.)Batsch)是我国最古老的树种之一,树形多样,树体优美,同时其果实可以食用,桃胶也是非常好的营养品,同时兼具观赏价值、经济价值和生态效益,是非常优秀的树木品种。本文通过对湖南常德地区38个品种的观赏桃进行物候观察和ISSR分子标记技术的实验,对其的遗传多样性进行分析,揭示了不同品种的观赏桃的遗传关系和亲缘关系,为观赏桃资源的发展和保护提供了理论性的支撑。其研究方法与结果如下: (一)实验使用了CTAB法与试剂盒法提取DNA,两种方法所提取的DNA纯度均能达到了实验要求,但是CTAB法所提取的DNA浓度更高,实验耗时更长,步骤更为繁琐,前期药品的配置与购买也需要更多的时间。 (二)实验采用了正交实验方法,对Taq DNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dDTPs、引物的浓度、PCR退火的温度、循环次数这几个方面进行了研究,结合科学的数学分析及对电泳图的仔细观察,得出在25ul的体系中,Taq DNA聚合酶浓度为0.4U,模板DNA含量为10ng-80ng,dNTPs为0.20mmol·L-1,引物的浓度选择0.3umol·L-1,循环次数为30次,并且在49.3℃的条件下退火为最佳的ISSR-PCR反应条件体系。 (三)实验在100引物中成功的筛选出10条(816、817、825、828、835、836、842、848、873、890)引物用于ISSR-PCR扩增,一共扩增出102条具有重复性且清晰的条带,其中具有多态性的条带占比例85.3%,每条引物扩增出具有多态性条带的数目在4条到12条不等,扩增的分子量在200~2500BP之间,说明观赏桃具有很强的遗传多态性。 (四)将38观赏桃品种按照枝型划分为5个种类,并进行多样性分析得出观赏桃整体多态位点百分率(P)为85.2%,平均Shannon信息指数(I)为0.3568,Nei基因多样性指数(H)为0.2511通过聚类分析,得出5个枝型种类的遗传距离分布在0.0145与0.1367之间,遗传一致度在0.8412与0.9536之间,可以推论,山桃花品种群与直枝型品种群历史上产生的地理距离应当比较接近,而帚型桃品种群与寿星桃品种群遗传距离诞生的地理位置较远。 (五)NTsys2.1e对38个观赏桃品种DNA样本进行聚类分析,得出照手白与照手姬之间遗传距离最近,白花山碧与红花紫叶垂枝之间遗传距离最远,同时发现,观赏桃有非常明显的依据枝型聚类的趋势,而且花型也是观赏桃聚类的标准。