【摘 要】
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该实验以MDBK细胞培养致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NCD毒株,采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,并根据BVDV NADL参考株序列设计合成的一对引物W1与W2,进行反转录PCR(RT-P
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该实验以MDBK细胞培养致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NCD毒株,采用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,并根据BVDV NADL参考株序列设计合成的一对引物W1与W2,进行反转录PCR(RT-PCR),扩增出P125基因区约400个碱基的片段.经PGEM-T载体连接后,克隆,测序,并与已发表的NADL、Osloss、SD-1、184、D、H、Yak等DVDV毒株序列进行比较.结果表明:NCD株P125基因区与184、D、H、Yak等毒株比较,无插入或缺失变异,但存在着核苷酸的替换;NCD株P125区的核苷酸序列、推导氨基酸序列与国内D株同源性最高,分别为98.1﹪、97.7﹪;与国外参考株NADL的同源性分别为82.0﹪、93.0﹪.经聚类分析初步认为NCD株属于Ia型.NCD株与长春184、H株核苷酸序列差异较大,而样缘关系较近,表明BVDV在同一地区存在多株不同进来来源的毒株,这为今后国内牛病毒性腹泻的诊断与防制提供了理论依据.
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