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本研究的目的是探讨大负荷力量训练中机体免疫、内分泌等变化规律,尤其是机体细胞免疫与分子免疫变化规律,旨在建立监测运动员训练过程中身体机能状态的敏感新指标。研究分两部分。实验Ⅰ.大负荷力量训练中机体免疫、内分泌、血液学指标变化规律的研究本研究分为力量训练组和对照组。实验组为14名省级优秀男子举重运动员,连续观察5周,其间,受试者按照要求完成“训练2周—调整1周—训练2周”的规定负荷的举重训练。“训练2周”中,每日两次举重训练课,每周训练6天,平均训练负荷为:强度5-8RM,大级别日训练量50,000kg,小级别日训练量30,000kg;“调整1周”中每日只进行一次小运动量的举重练习课。对照组为同龄男子散手业余培训班成员,身体健康,在试验期采血前一周均未进行大负荷力量等练习。于试验前及训练开始后的每个周末采血,测试血清肌酸激酶(CK)、血尿素氮(BUN);血睾酮(T)、血皮质醇(C)、血黄体生成素(LH)、血卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL);红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、网织红细胞(Ret);淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD14~+、CD16~+、CD56~+、HLA-DR~+、Vα-24、Vβ-11等);外周血白细胞的白介素2、4、10(IL-2、IL-4、IL-10)和γ-干扰素(IFN-γ)的基因表达(Real Time RT-PCR方法,定量测定mRNA)等。结果显示:在两个“训练2周”中,受试者疲劳感明显,CK、BUN均显著性升高,T略有下降、C略有升高、T/C呈下降趋势、LH和FSH有所波动;在“调整1周”中,上述指标有所回复。在“训练2周—调整1周—训练2周”中,Hb呈较明显下降变化,在“调整1周”末降至最低点,与试验前比较平均降低8g/L,在试验末Hb回复;Ret呈明显上升变化。在“训练2周—调整1周—训练2周”中,CD8~+、CD14~+、CD16~+、CD56~+、Vα-24呈升高变化,HLA-DR~+仅在前一个“训练2周”中升高,CD3~+、CD4~+、Vβ-11、有所波动,CD4~+/CD8~+在第一个“训练2周”中明显下降,在随后逐渐上升。在“训练2周—调整1周—训练2周”中,IL-2、IL-4的mRNA表达先增加后降低,IL-10的mRNA表达呈持续降低变化,IFN-γ的mRNA表达以及IFN-γmRNA / IL-4 mRNA比值均在训练期明显降低,在调整期明显回复。对照组运动员上述指标无明显变化。结论:1、大负荷力量训练导致CK、BUN显著性升高。2、大负荷力量训练导致皮质醇、泌乳素升高,LH升高、FSH下降。3、大负荷力量训练导致一过性红细胞、血红蛋白下降,但网织红细胞明显增高,表明训练没有导致造血功能抑制。4、大负荷力量训练导致CD8~+增加,CD4~+/CD8~+第一次“训练2周”下降而第二次“训练2周”没有下降。而IL-2、IL-10、IFN-γ的基因表达下降,IL-2、IFN-γ的基因表达、IFN-γmRNA/IL-4mRNA随负荷的增加下降,表明这三个指标是反映训练状态的免疫机能敏感指标。反映T细胞免疫调节功能向抑制方向发展。5、考虑到IFN-γmRNA主要来自Th1细胞,IL-4mRNA主要来自Th2细胞,IFN-γmRNA/IL-4mRNA一定程度上可反映Th1/Th2,说明大运动量训练导致Th1/Th2平衡向Th2方向发展。实验Ⅱ.国家男子排球队员大赛前集训期间细胞和分子免疫变化规律的研究为了验证上述实验中有关细胞因子基因表达与体能状态的关系,本研究进一步以国家男子排球队员为对象,观察了为期2个月的“联赛结束后阶段”--“集训中阶段”--“奥运选拔赛前阶段”(联赛结束后阶段,队员刚刚结束国内联赛,身体最疲劳;集训中阶段,运动员主要进行技、战术训练,不进行大运动量训练,并进行营养和医疗干预;奥运选拔赛前阶段,队员竞技状态调至最佳,准备进行比赛。由于客观原因,无法显示国家队的训练计划、训练负荷、训练量、训练内容等,但总体上此次集训以调整体能为主要目的)。分集训前、集训中、集训后共三次空腹采血,测试血清肌酸激酶(CK)、尿素氮(BUN);红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb);白细胞、CD3+、CD4+、CD8+、CD14+;外周血白细胞的白介素2、4、10(IL-2、IL-4、IL-10)和γ-干扰素(IFN-γ)的基因表达(Real Time RT-PCR方法,定量测定mRNA)等。结果显示:训练中CK、BUN显著性下降;RBC、Hb不变;白细胞、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+无显著性变化,CD14+显著性下降;训练前后IL-2的基因表达无显著性变化,IFN-γ基因表达呈增加趋势,IL-4的基因表达显著性下降,IFN-γmRNA/IL-4mRNA显著性升高,IL-10基因表达显著性增加。结论:1、调整性训练导致CK、BUN下降,提示运动员机能有所恢复。2、调整性训练导致外周血白细胞IFN-γ基因表达呈增加趋势、IL-4基因表达显著性下降、IFN-γmRNA/IL-4mRNA显著性增加,IL-10基因表达显著性增加。提示这些指标是排球训练中反映机能状态的免疫机能敏感指标。3、调整性训练中Th1/Th2平衡向Th1方向移动。本研究的创新1.本研究中采用的细胞因子mRNA定量方法是导师课题组的专利技术。专利名称:生理状态下外周血中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10基因表达实时荧光定量PCR检测,专利号分别是:200310109560.2;200310109561.7;200310109562.1;200310109559.x。2.首次采用实时荧光定量PCR方法在力量训练及排球运动员训练中检测白细胞IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的基因表达。检测这些细胞因子的mRNA与检测血液中这些细胞因子的蛋白水平有所不同,前者定位在细胞内,不论其以自分泌还是以旁分泌形式发挥作用,均能反映细胞功能;后者是这些因子分泌、排泄、代谢、以及与配体结合等因素的综合结果。因此,检测血中因子(蛋白质水平)是不能替代检测细胞mRNA的。3.首次提出白细胞IFN-γ、IL-2的基因表达,以及IFN-γmRNA/IL-4mRNA比值是监测运动训练中机体免疫功能变化的敏感指标。这些指标的变化比CD4/CD8比值更为敏感。