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目的：通过重组canstatin蛋白、As2O3及二者联合方式分别干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肿瘤血管内皮细胞(Td-EC)，探讨干预因素对HUVEC和Td-EC生物学影响，为As2O3联合用药方案抗肿瘤的可行性和有效性提供实验基础和理论依据。
方法：1．分别培养稳定转染pcDNA3.1-Canstatin-3Flag分泌型重组质粒肝癌HepG2细胞、HepG2细胞72h，提取上清液经超滤浓缩后，用Western-blot鉴定上清液中canstatin蛋白表达情况；2、HUVEC分离培养及鉴定。3．用肝癌HepG2细胞培养上消液培养HUVEC72h，收集细胞，RT-PCR检测TEM1和TEM8的表达情况。4．实验按干预因素不同分重组组(稳定转染pcDNA3.1-Canstatin-3Flag分泌型重组质粒的肝癌HepG2细胞培养上清液)、As2O3组(2μmol/L)、联合组(重组canstatin与As2O3蛋白)、空白组(HepG2细胞培养上清液)，各因素分别干预HUVEC和Td-EC，通过绘制生长曲线、Transwell小室法、流式细胞术、内皮细胞成管实验等方法检测细胞生物学。
结果：1．Western-blot检测重组质粒肝癌HepG2细胞培养上清液，可见大小约为26KD的Canstatin蛋白条带。2．培养的HUVEC经荧光免疫染色后，可见细胞质内有黄绿色荧光，表明人Ⅷ因子相关抗原存在：3．肝癌HepG2细胞培养上清液培养诱导HUVEC，RT-PCR扩增产物电泳显示约287bp及460bp的条带，提示细胞表达肿瘤血管内皮细胞标志物TEM1和TEM8，4.1.对细胞生长活力的影响：细胞每24h倒置显微镜下观察细胞生长情况、存活细胞计数，绘制细胞生长曲线；结果显示，HUVEC、Td-EC随培养时间延长，存活细胞数递减，呈时间依赖性，前后天存活细胞数比较p＜0.05，实验组间比较p＜0.05;重组组、As2O3组与对照组比较p＜0.05，联合组与对照组比较p＜0.01;Td-EC空白组存活细胞数增加比HUVEC空白组明显，二组间比较p＜0.05;Td-EC实验各组存活细胞数减少比对应HUVEC实验各组明显，组间比较p＜0.05。4.2对细胞凋亡的影响，凋亡率(HUVEC，Td-EC)，重组组(12.2±0.32%，16.43±0.27%)、As2O3组(9.76±0.170%，14.05±0.21%)和联合组(15.78±0.18%，20.69±0.23%)，空白组(6.30±0.13%，4.73±0.14%)，单一用药组间比较p＜0.05，联合组分别与单一用药组比较p＜0.01，实验各组与空白组比较p＜0.01:Td-EC各组与对应的HUVEC各组比较p＜0.05，空白组之间比较p＜0.05。4.3对细胞迁移、管腔能力的影响，迁移细胞数(HUVEC，Td-EC)，重组组(29.20±1.30，27.60±0.55)、As2O3组(36.00±1.00，33.20±1.30)、联合组(24.33±1.36，21.00±1.26)、空白组(45.40±1.14，50.60±1.34)；管腔形成数(HUVEC，Td-EC)分别为，重组组(4.40±1.03，3.50±0.94)、As2O3组(6.00±1.14，4.96±0.93)、联合组(2.90±0.92，2.30±0.75)，空白组(13.23±0.89，14.13±1.28)，其中联合组迁移细胞数、管腔形成数最少，二组间比较p＜0.05；实验各组与空白组比较p＜0.01;Td-EC各组与对应的HUVEC各组比较p＜0.05，两细胞空白组比较p＜0.05。
结论：1．稳定转染重组质粒的肝癌HepG2细胞培养上清液中有表达Canstatin蛋白。2．HUVEC经诱导鉴定为Td-EC。3．Td-EC比HUVEC具有更强细胞成活能力、血管形成能力及迁移能力。4．三个干预冈素对内皮细胞有促进凋亡作用和抑制细胞成活能力、血管形成、迁移能力，并以联合组作用最强，同时Td-EC对上述作用的敏感性高于HUVEC。
方法：1．分别培养稳定转染pcDNA3.1-Canstatin-3Flag分泌型重组质粒肝癌HepG2细胞、HepG2细胞72h，提取上清液经超滤浓缩后，用Western-blot鉴定上清液中canstatin蛋白表达情况；2、HUVEC分离培养及鉴定。3．用肝癌HepG2细胞培养上消液培养HUVEC72h，收集细胞，RT-PCR检测TEM1和TEM8的表达情况。4．实验按干预因素不同分重组组(稳定转染pcDNA3.1-Canstatin-3Flag分泌型重组质粒的肝癌HepG2细胞培养上清液)、As2O3组(2μmol/L)、联合组(重组canstatin与As2O3蛋白)、空白组(HepG2细胞培养上清液)，各因素分别干预HUVEC和Td-EC，通过绘制生长曲线、Transwell小室法、流式细胞术、内皮细胞成管实验等方法检测细胞生物学。
结果：1．Western-blot检测重组质粒肝癌HepG2细胞培养上清液，可见大小约为26KD的Canstatin蛋白条带。2．培养的HUVEC经荧光免疫染色后，可见细胞质内有黄绿色荧光，表明人Ⅷ因子相关抗原存在：3．肝癌HepG2细胞培养上清液培养诱导HUVEC，RT-PCR扩增产物电泳显示约287bp及460bp的条带，提示细胞表达肿瘤血管内皮细胞标志物TEM1和TEM8，4.1.对细胞生长活力的影响：细胞每24h倒置显微镜下观察细胞生长情况、存活细胞计数，绘制细胞生长曲线；结果显示，HUVEC、Td-EC随培养时间延长，存活细胞数递减，呈时间依赖性，前后天存活细胞数比较p＜0.05，实验组间比较p＜0.05;重组组、As2O3组与对照组比较p＜0.05，联合组与对照组比较p＜0.01;Td-EC空白组存活细胞数增加比HUVEC空白组明显，二组间比较p＜0.05;Td-EC实验各组存活细胞数减少比对应HUVEC实验各组明显，组间比较p＜0.05。4.2对细胞凋亡的影响，凋亡率(HUVEC，Td-EC)，重组组(12.2±0.32%，16.43±0.27%)、As2O3组(9.76±0.170%，14.05±0.21%)和联合组(15.78±0.18%，20.69±0.23%)，空白组(6.30±0.13%，4.73±0.14%)，单一用药组间比较p＜0.05，联合组分别与单一用药组比较p＜0.01，实验各组与空白组比较p＜0.01:Td-EC各组与对应的HUVEC各组比较p＜0.05，空白组之间比较p＜0.05。4.3对细胞迁移、管腔能力的影响，迁移细胞数(HUVEC，Td-EC)，重组组(29.20±1.30，27.60±0.55)、As2O3组(36.00±1.00，33.20±1.30)、联合组(24.33±1.36，21.00±1.26)、空白组(45.40±1.14，50.60±1.34)；管腔形成数(HUVEC，Td-EC)分别为，重组组(4.40±1.03，3.50±0.94)、As2O3组(6.00±1.14，4.96±0.93)、联合组(2.90±0.92，2.30±0.75)，空白组(13.23±0.89，14.13±1.28)，其中联合组迁移细胞数、管腔形成数最少，二组间比较p＜0.05；实验各组与空白组比较p＜0.01;Td-EC各组与对应的HUVEC各组比较p＜0.05，两细胞空白组比较p＜0.05。
结论：1．稳定转染重组质粒的肝癌HepG2细胞培养上清液中有表达Canstatin蛋白。2．HUVEC经诱导鉴定为Td-EC。3．Td-EC比HUVEC具有更强细胞成活能力、血管形成能力及迁移能力。4．三个干预冈素对内皮细胞有促进凋亡作用和抑制细胞成活能力、血管形成、迁移能力，并以联合组作用最强，同时Td-EC对上述作用的敏感性高于HUVEC。