5’-混合脱氧单核苷酸分离纯化的工艺研究

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脱氧核糖核酸(DNA)是一种具有遗传特性的基本物质,是生物体的重要组成部分,它在生物体的个体生长、繁殖、遗传、变异等各个环节起着重要作用,有促进细胞生长、增强细胞活力及改善机体代谢的作用。5’-混合脱氧单核苷酸是以生物提取的脱氧核糖核酸(DNA)为原料,经核酸酶P1的水解而得来的,是由脱氧核糖腺嘌呤核苷酸(dAMP)、脱氧核糖鸟嘌呤核苷酸(dGMP)、脱氧核糖胞嘧啶核苷酸(dCMP)、脱氧核糖胸腺嘧啶核苷酸(TMP)所组成。5’-混合脱氧单核苷酸能够提供细胞和组织修复所必需的核酸营养,参与体内核酸代谢过程。在临床上常用于治疗由各种原因引起的白细胞减少症和血小板减少症、贫血及再生障碍性贫血、炎症等多种疾病。 核酸酶P1(E.C.3.1.30.1)是一种含有3个锌原子的糖蛋白,分子质量约为36000Da,其中碳水化合物含量大约占17%,酶蛋白部分由270个氨基酸残基组成,富含疏水氨基酸,它作用于核糖分子中3’-碳原子上的羟基与磷酸之间形成的二酯键,从而水解单链DNA和RNA产生5’-单核苷酸,它是少数几种需求量大且有可能大规模生产的蛋白酶之一。 在5’-混合脱氧单核苷酸的工业生产中,通用的生产方法是利用核酸酶P1水解DNA,再对酶解液进行分离纯化。在5’-混合脱氧单核苷酸的生产中,质量和成本的限制因素主要是分离纯化。目前,工业上有采用201×7阴离子交换树脂或者201×8阴离子交换树脂进行分离纯化的,也有用D293大孔阴离子交换树脂的,也有报道用超滤法来进行纯化的,这些方法虽然在工业上使用了几十年,但是存在一些共
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