目的:　　RT-qPCR技术广泛应用于microRNA(miRNA)表达定量，其中stem-loop RT-PCR技术使用最为频繁，但是该方法耗时耗试剂，并且不利于快速筛选miRNA。因此我们欲建立一种能快速筛选和定量miRNA的新方法。　　方法:　　1、本论文建立了一种新的称为“通用stem-loop引物”(USLP)方法，该方法将传统stem-loop(TSLP)的3端的特异性片段替换成8个随机碱基，使其能快速筛选和定量miRNA。　　2、设计了三个实验测试USLP方法的敏感性、特异性和重复性;　　1)将合成的miR-155标准品十倍梯度稀释7个数量级（109-103拷贝/μL），并将稀释后的不同浓度的miR-155作为模板进行qRT-PCR以观测方法的敏感性;　　2)将PCR产物通过3％琼脂糖凝胶电泳、溶解曲线和测序三种方法共同验证USLP方法的特异性;　　3)选取3个浓度梯度的合成miR-155标准品（108-106拷贝/μL）进行qRT-PCR重复实验二十次，用以验证新方法的重复性;　　3、将29例健康体检和58例服用FK506（免疫抑制剂）的肾移植患者的T淋巴细胞激活培养，通过比较USLP和TSLP两方法在T淋巴细胞激活的不同时间段（0h、24h、48h和72h）的miRNA表达变化，来判断新方法的实际应用情况。　　结果:　　1、通过使用Primer5软件成功设计用于RT的通用stem-loop引物、以及相应的qPCR引物，包括特异性的正向引物和通用反向引物。　　2、USLP方法的敏感性、特异性和重复性结果:　　1)敏感性:最低可以检测到103拷贝/μL的模板RNA。　　2)特异性:通过分析溶解曲线、琼脂糖凝胶电泳和测序结果，可以得出USLP和TSLP方法的PCR后产物单一且为目的产物。　　3)重复性:CV值＜2.5％，说明USLP方法的高重复性。　　3、健康体检和服用FK506的肾移植患者外周血的T淋巴细胞刺激培养不同阶段的miRNA表达变化:　　1)使用USLP方法发现，miR-150-5p（miR-150）和miR-155-5p（miR-155）随着T淋巴细胞刺激培养时间延长出现表达变化:miR-150在72h时表达降到最低，降低了约10倍;miR-155在72h时表达升高到最高，升高近7倍。　　2) USLP检测在T细胞激活过程中miR-150与miR-155表达变化趋势与TSLP方法一致。　　3)健康体检人员和免疫抑制肾移植病人的T细胞经PHA刺激培养48h后，免疫抑制病人的miR-150和miR-155变化的幅度小于健康体检人员。　　结论:　　1、USLP方法是一种简单、快速、价廉，并能筛选和定量miRNA的新方法。　　2、随着T细胞激活，免疫抑制患者和健康体检人员的miR-150与miR-155表达变化幅度不同，暗示检测miR-150与miR-155对判断个体免疫系统的状态有意义。