Hic-5在小鼠2/3肝切除后的表达变化及其机制研究

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xbqd2000
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:  1、通过建立C57BL/6小鼠2/3肝切除动物模型,检测Hic-5在肝再生过程中不同时间点的表达变化。  2、研究Hic-5动态变化与肝细胞再生之间的相关关系及可能机制。  方法:  1、选取40只8-10周龄雄性健康C57BL/6小鼠,体重约20-25g,饲养于SPF动物房中。利用分叶顺次肝大部切除技术建立小鼠2/3肝切除后肝再生动物模型。  2、分别于术后0h、12h、24 h、36h、48 h、72 h、120 h、168 h,8个时间点采集血液和肝组织标本,每个时间点5只小鼠。  3、血清学标本采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝切后不同时间点谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的表达变化情况;各时间点肝脏组织行HE染色,观察肝再生情况;采用免疫组织化学技术(IHC)检测各时间点肝细胞Ki-67和肝组织Hic-5的表达情况,分析两者变化趋势之间可能存在的相关关系;以免疫荧光技术(IF)检测各时间点肝组织中Hic-5的表达量变化及分布;采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测肝切后不同时间点Hic-5mRNA及CyclinD1mRNA表达水平,分析两者表达变化之间可能存在的相关关系;以免疫印迹技术(WB)检测肝切后不同时间点小鼠肝脏组织中Hic-5与CollagenⅠ蛋白表达水平变化,分析其变化的相关关系。以上收集的数据用均数±标准差((x)±s)来对数据进行统计学描述,用SPSS19.0统计学软件进行统计分析,组间行单因素方差LSD法分析,相关关系用Pearson相关系数分析法进行分析比较,P<0.05时,其差异具有统计学意义。  结果:  1、各组小鼠均顺利完成2/3肝切除术,术后存活率100%。ALT、AST均于术后开始升高,其峰值位于12h,且与0h相比,差异具有统计学意义,并于术后24 h随时间的推移逐渐降低,于术后168 h恢复至接近0h水平,与0h相比,差异无统计学意义。  2、HE染色见肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列,未见明显肝细胞点状、灶状坏死,肝细胞增殖从术后逐渐增多,在36h处于分裂增殖的肝细胞明显增多,且可见大量小核细胞,后随时间的推移,增殖的肝细胞逐渐减少,再生肝脏肝索结构紊乱。  3、肝细胞Ki-67阳性率于0h为(9.58±0.09)%,后随术后时间逐渐升高,于术后36h达到高峰(77.13±1.65)%,与0h比较,差异具有统计学意义,从48 h开始逐渐降低,至168 h为(12.29±0.64)%。Hic-5随时间点的表达情况则出现与肝细胞Ki-67表达相反的趋势,于12 h Hic-5出现表达高峰,后呈先降低再逐渐升高的趋势,表达的最低点位于36h,其光密度值为(3938.27±82.46),与12h比较,差异具有统计学意义,从48h开始Hic-5的表达逐渐加强,至168 h升高达(20075.26±246.64),高于12h水平,Ki-67和Hic-5的表达变化趋势经Pearson相关性分析结果显示两者表达趋势呈现负相关关系。  4、Hic-5免疫荧光的变化趋势与其免疫组化一致,于12h达第一个高峰后呈先降低再升高的趋势,最低点位于36h,其荧光强度为(6491.34±162.07),与12h比较,差异具有统计学意义,于48 h开始逐渐增强,在168 h其荧光强度达(30824.33±609.44),Hic-5荧光表达趋势与Ki-67的表达趋势经Pearson相关性分析结果显示两者表达趋势呈现负相关关系。  5、Hic-5mRNA于术后12h达高峰,后呈现先降低再逐渐升高的趋势,其最低点在术后36 h为(0.19±0.01),与12h相比,差异具有统计学意义,于48 h开始逐渐升高,168h达(1.06±0.03);Cyclin D1mRNA与Hic-5mRNA表达趋势相反,术后呈逐渐升高至峰值后随时间逐渐降低至近0h水平,于术后36h达到最高水平为(2.53±0.12),与0h比较,差异具有统计学意义,两者变化趋势经Pearson相关性分析结果显示两者表达趋势呈现负相关关系。  6、Hic-5蛋白表达与其mRNA变化趋势一致,于术后12h达第一个高峰后逐渐下降,在术后36h达最低水平,其灰度比值为(0.19±0.09),与12h相比,差异具有统计学意义,从48 h开始逐渐增强,至168 h达(0.91±0.16),高于术后12h峰值;CollagenⅠ蛋白表达12h呈高表达状态,后逐渐降低,于36h达到最低值为(0.11±0.04),与12h比较,差异具有统计学意义,后逐渐增高,于168 h达(0.56±0.07),两者蛋白表达变化经Pearson相关性分析结果显示两者表达趋势呈现正相关关系。  结论:  1、小鼠2/3肝切除后,Hic-5动态变化调控肝再生过程,并与肝再生过程存在负相关关系,是肝再生过程中的负性调节基因。  2、在肝再生的诱导期,Hic-5通过表达下调促进肝再生,而在肝再生的后期,Hic-5通过表达上调可能促进细胞的成熟、分化和抑制细胞的过度增殖。  3、Hic-5通过动态调节细胞外CollagenⅠ的合成与降解调节肝再生过程。
其他文献
互联网技术的发展使新时期高校思想政治教育面临着新机遇和挑战.当前大学生“QQ族”现象正是这一挑战的反映,如何发挥网络信息优势,把思想政治教育的内容有机融入其中引导学
随着入世,中国科学界比以往更多地说到的一件事,就是中国科学家何时才能在诺贝尔奖章上刻上自己的名字。 2001年的12月10日,在瑞典举行的诺贝尔奖颁奖典礼吸引了世界的目光
陶,讲究的是一双手对和它亲近着的黏土的控制,更讲究对于火候和温度的控制。把这种“控制”的概念引入到我们现实的陶艺教育体系和教育体制之中,就在于我们必须对当前的教育
期刊
本文提出在正态分布条件下面向不同分布多类问题的Bayes分类误差逼近算法.本算法是基于上界逼近的迭代算法.Bayes错误概率上界的描述通过对最小错误概率的积分域进行分割,对
“中国画创新最难”——这大概是很多画中国画的画家从心底里发出的感慨。为什么中国画创新最难?因为中国画积累太丰厚,上下几千年,历代大师迭出,创造成果累累,你想重新做出
摘要 伴随着我国的教育政策的变化,中职文秘专业教学的变革也不断加深。但是,当前的中职文秘专业教学与社会实践的需求还存在一定的磨合。文秘专业教学和专业实践是加强中职文秘教学管理的重要方式。本文主要探讨如何加强中等职业学校文秘专业教学改革,并提出一些有益的建议。  关键词 中等职业学校 文秘专业 教学改革  中图分类号:G424 文献标识码:A  1 中职学校文秘专业教学现状  (1)专业人才培养力度
目的:对广西壮族正常人群的脊髓小脑性共济失调(SCA)常见3种亚型(SCA1,SCA2,SCA3)致病基因的三核苷酸CAG重复次数进行检测和分析,探讨其CAG重复数的正常变异范围。方法:采集
劳思在家里排行第四,劳思与老四同音。但取名劳思,还有一层寓意。唐朝大学者韩愈《进学解》云:“业精于勤,荒于嬉”、“行成于思,毁于随”。劳思把“业精于勤成于思”作为自
股指期货:可行,但应非常谨慎 近期有关推出股指期货的呼声此起彼伏。香港中文大学工商管理学院教授、前世界银行顾问郎咸平博士认为,目前国内推出股指期货是可行的,因为市场