日本沼虾及日本对虾的细胞培养

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本文首次报道了日本沼虾血细胞的培养,比较了五种不同的培养基(A、B、C、D、E),两种不同的渗透压(472mmol/Kg、750mmol/Kg)中日本沼虾原代培养血细胞的生长状况,并以碱性磷酸酶活力为测定指标。结果表明,培养基A为最适培养基,其次为B,渗透压472mmol/Kg较750mmol/Kg更利于细胞生长。在A培养基的基础上尝试了日本沼虾血细胞原代培养的首次传代并获得成功。基础培养基选用美国GIBCO公司的M199,并添加20%胎牛血清,100单位/ml青霉素,100μg/ml链霉素,用5N NaCl调节渗透压为472mmol/Kg,pH值调至7.0±0.1。我们对原代和传代血细胞进行了比较,并观察了在上述培养条件下加入1g/L葡萄糖,0.1mg/L维生素C对传代血细胞生长及贴壁的影响。讨论了金属离子Cu2+、Zn2+对日本沼虾传代血细胞碱性磷酸酶活性及总磷含量的影响。实验结果表明,加入适量维生素C可促进细胞贴壁,1g/L葡萄糖的加入可促进细胞生长。培养液中加入微量Cu2+可提高日本沼虾传代血细胞碱性磷酸酶的活性,当Cu2+浓度为2μg/L时其活性有显著提高(P<0.05),在此浓度下总磷含量也最高。Zn2+在80μg/L时对碱性磷酸酶活力无显著影响,但传代血细胞中总磷含量较高,细胞生长较其它组也好。实验最后我们对日本对虾的肌肉和血细胞进行了体外培养的尝试,并对体外培养的血细胞进行了电镜观察。在199培养基中添加20%加热灭活的胎牛血清及一些氨基酸、无机盐等,血细胞在一周内即可形成细胞单层,传代后,细胞不能贴壁。电镜观察表明血细胞贴壁后变形伸展,细胞内可见少许空泡。
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