猪脂肪细胞分化、脂肪沉积相关候选基因的分离、定位及遗传效应分析

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脂肪组织是一种高度分化的组织,在胚胎发育晚期出现,出生后迅速增长。脂肪组织的生长包括新脂肪细胞的生成(即脂肪细胞分化)和脂肪细胞体积的增大。脂肪细胞增强子结合蛋白(The adipocyte enhancer-binding protein,AEBP1)是在小鼠的肥胖研究中发现的一个脂肪细胞分化相关的重要转录抑制因子。在脂肪组织脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty acid-binding protein,aP2)基因启动子邻近区域AE-1存在AEBP1的识别区域,而aP2基因编码的蛋白可以作为脂肪细胞分化的标志。小鼠AEBP1基因通过选择性剪接形成两种转录本AEBP1和ACLP(Aortic carboxypeptidase-like protein,主动脉羧肽酶类样蛋白),其编码的两种蛋白AEBP1和ACLP功能完全不同。目前,猪AEBP1基因的序列、结构和功能尚未见报道,本研究首次利用电子克隆技术结合PCR,对猪AEBP1基因的部分cDNA和DNA序列进行了分离和测序,并对不同品种的猪AEBP1基因序列进行了生物信息学分析;利用猪辐射杂种克隆板(IMpRH)对猪AEBP1基因进行了染色体精细定位;利用RT-PCR方法对猪AEBP1基因是否存在不同转录本进行了鉴定,并分别对其推导的氨基酸序列进行了生物信息学分析,预测蛋白质的基本特征,同时在转录水平检测了不同转录本在猪的各个组织表达分布情况。 为了确定猪脂肪细胞分化相关基因AEBP1和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor-γ,PPARγ)基因,脂肪沉积候选基因黑素皮质素-4受体(Melanocortin-4 receptor,MC4R)基因、黑素皮质素-5受体(Melanocortin-5 receptor,MC5R)基因和胰岛素样生长因子-2(insulin-like growth factors-2,IGF2)基因以及肌内脂肪含量候选基因PRKAG3(Protein Kinase Adenosine Monophosphate-Activated γ3-Subunit)的遗传学效应,以华中农业大学试验猪场2002年屠宰的大白、长白和梅山猪等三个品种和大白×长白、长白×大白、大白×梅山、梅山×大白猪(以下分别简称大长、长大、大梅、梅大)等四个杂交组合群体(共336头)以及2003、2004年屠宰的大白×梅山猪F2代群体(共290头)为试验材料,利用PCR-RFLP分子标记技术,对猪AEBP1、PPAR γ、MC4R、MC5R、IGF2和PRKAG3进行了基因型分型,并与背膘厚等胴体性状、肌内脂肪含量等肉质性状进行关联性分析;此外,为了筛选更多的SNP,对猪脂肪细胞分化相关基因脂肪细胞定向和分化因子(adipocyte determination and differentiation dependent factor 1,ADD1)基因的不同猪品种DNA进行分离、测序并进行序列比对,取得了以下结果: 1.猪AEBP1基因cDNA和DNA序列的分离、测序和序列分析:以人AEBP1基因序列作为探针,在NCBI的EST数据库中比对得到猪EST序列并进行拼接。根
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