目的：通过稳定复制的SD大鼠慢性阻塞性肺疾病模型进行给药动物实验,研究慢性阻塞性肺疾病模型大鼠运用理肺汤干预治疗后的一般状态、肺功能、病理组织学、肠道菌群等相应指标的变化情况,阐明慢性阻塞性肺疾病大鼠存在肠道菌群微生态失衡,理肺汤可通过调整肠道菌群结构治疗慢性阻塞性肺疾病。通过电子顺磁共振技术等手段检测慢性阻塞性肺疾病大鼠氧自由基、内毒素、细胞因子水平,从氧化应激损伤和气道炎症方面完善理肺汤调整肠道菌群结构治疗慢性阻塞性肺疾病的作用机理。方法：1.健康清洁级雄性SD大鼠36只,随机分为模型对照组18只,空白对照组18只,采用烟熏加脂多糖滴注复合臭氧暴露的方法建立氧化应激性慢性阻塞性肺疾病大鼠模型。观察大鼠的一般状态,对各组大鼠进行肺功能测定。取材后,制备支气管肺泡灌洗液涂片进行炎性细胞计数；肺组织HE染色判断肺组织损伤程度；通过细菌培养,观察肠道内肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌及乳酸菌等的菌群、菌种数量,进行肠道菌群微生态研究；运用分子生物学PCR方法,分析大鼠肠道菌群的16S rDNA基因序列,观察肠道菌群结构的变化。2.健康清洁级雄性SD大鼠70只,随机分为：空白对照组、模型对照组、地塞米松组、益生菌组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,每组10只。除空白对照组外建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型。糖皮质激素组、益生菌组大鼠分别予糖皮质激素与益生菌灌胃,中药高、中、低组予不同剂量的理肺汤灌胃。药物干预结束后,观察大鼠的一般状态,对各组大鼠进行肺功能测定。取材后,肺肠组织经HE染色进行镜下观察；通过细菌培养,观察肠道内肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌及乳酸菌等的菌群、菌种数量,进行肠道菌群微生态研究；运用分子生物学PCR和高通测序的方法,分析大鼠肠道菌群的16S rDNA基因序列,观察肠道菌群结构的变化；采用电子顺磁技术对各组大鼠的血清及肺组织匀浆中的超氧阴离子自由基、一氧化氮自由基、羟基自由基、超氧化物歧化酶进行检测。采用ELISA法检测血清中IL-1、 4、 5、13、16、 17、 CRP、 TNF-α水平；采用鲎试剂基质显色方法,观测血浆内毒素分泌水平。采用嗜酸性粒细胞直接计数的方法进行血清嗜酸性粒细胞计数。结果1慢性阻塞性肺疾病大鼠肠道菌群的结构分析模型对照组大鼠在造模过程中都出现一定程度的呼吸急促、咳嗽频作、精神萎靡、牙齿变黄、毛发零乱、干枯、躁动不安,食量减少。空白对照组大鼠毛发顺滑,活动灵敏,饮食正常。肺功能检测结果,COPD模型对照组大鼠FVC、FEV1、 FEV1/FVC%较空白对照组偏低。肺组织病理切片,HE染色后可见：COPD模型对照组大鼠细支气管狭窄变形,呼吸性支气管管腔狭小甚至闭塞,管壁明显增厚,有小叶中心型肺气肿和全小叶型肺气肿形成；上皮细胞增生,杯状细胞显著增生；粘膜下及细支气管周围有大量炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主；气道平滑肌增厚；肺泡壁变薄,肺泡腔扩大,部分肺泡破裂融合形成肺大泡。空白对照组支气管壁光滑,褶皱明显规则；肺泡完整,规律。支气管肺泡灌洗液(BALF)结果,模型对照组在BALF中巨噬细胞和淋巴细胞多于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清中GSH/GSSG的比值结果,模型对照组大鼠血清中GSH水平降低,GSSG水平升高,二者比值降低,差异有统计学意义(p<0.05)。肠组织病理切片,HE染色后可见,模型对照组结肠与盲肠组织肌层与粘膜层之间均有嗜酸性粒细胞。细菌培养结果,模型对照组大鼠肠杆菌和肠球菌含量增加,双歧杆菌和乳酸杆菌含量明显减少,以肠杆菌和乳酸杆菌为主(P<0.05)。 16SrDNA结果显示,模型对照组muciniphila、 Bacteroides、 Prevotella、 Lactobacillus数量减少,Oscillospira、 Prevotella数量增多。2理肺汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠肠道菌群微生态的影响及机制研究熏烟七天后大鼠出现咳嗽、喘息表现,熏烟四月后出现喘息明显,喉间痰鸣,精神萎靡、拱背蜷缩,皮毛发黄等表现。空白对照组无阳性症状,而其余模型对照组、地塞米松组、益生菌组、中药低、中、高剂量组大鼠外观上可见其皮毛黄涩无光泽且时有脱落、消瘦等表现,同时出现呼吸急促、烦躁不安、咳嗽喘息、排尿排便增多等症状,严重者反应迟钝。给药结束,模型对照组、益生菌组症状变化不明显,中药组和地塞米松组有一定程度减轻。各用药组大鼠的肺功能经不同药物治疗后均得到不同程度的改善,高剂量组和地塞米松组治疗后的肺功能更接近于空白对照组,中剂量组次之,益生菌组和低剂量组效果稍差,但仍优于模型对照组。肺组织HE染色结果显示病变程度从高到低依次为模型对照组,中药低剂量组,益生菌组,中药中剂量组,中药高剂量组,地塞米松组,空白对照组。细菌培养结果显示,与模型对照组相比,理肺汤不同剂量和益生菌组大鼠肠道中肠杆菌和肠球菌含量明显降低,双歧杆菌和乳酸杆菌含量明显升高。与空白对照组相比,模型对照组大鼠肠道中肠杆菌和肠球菌含量明显升高,双歧杆菌和乳酸杆菌含量明显降低。与地塞米松组相比,益生菌组在双歧杆菌与其差异有统计学意义,中药不同剂量组之间未呈现出一定的量效关系。16SrDNA结果显示,经地塞米松和理肺汤中高剂量组治疗后的慢性阻塞性肺疾病大鼠的肠道菌群结构越来越接近空白对照组。乳酸杆菌属和普鲁氏杆菌在理肺汤三个剂量组之间存在剂量相关性,高剂量组的丰度显著高于低剂量组。顺磁结果显示,模型对照组大鼠血清和肺组织匀浆对氧自由基的清除率低于空白对照组,差异有统计学意义,经药物治疗后,大鼠血清和肺组织匀浆对氧自由基的清除率较模型对照组有所升高,其中地塞米松组优于理肺汤组,优于益生菌组,理肺汤三个剂量组之间未呈现出一定的量效关系。细胞因子检测结果显示,模型对照组大鼠血清中IL-1、4、5、13、16、 17、 CRP、 TNF-α,内毒素水平高于空白对照组,差异有统计学意义,经药物治疗后,大鼠血清中IL-1、 4、5、13、16、17、 CRP、 TNF-α,内毒素水平较模型对照组有所降低,其中地塞米松组优于理肺汤组,优于益生菌组,理肺汤三个剂量组之间呈现出一定的量效关系,高剂量组优于低中剂量组。嗜酸性粒细胞计数结果显示,地塞米松组大鼠血清嗜酸性粒细胞计数最低,COPD模型对照组最高,理肺汤三个剂量组之间未呈现出一定的量效关系。结论1本实验成功复制氧化应激性慢性阻塞性肺疾病大鼠模型,慢性阻塞性肺疾病大鼠存在肠道菌群微生态失衡。2各组大鼠的肺组织病理学炎症评分可体现各类治疗药物的疗效差别。3理肺汤在治疗慢性阻塞性肺疾病的同时肠道菌群结构发生改变,高剂量组的肠道菌群结构更接近于正常大鼠。4理肺汤可能通过调节COPD大鼠的氧化应激损伤、抑制气道炎症和内毒素水平释放调控COPD肠道菌群微生态。