晚期糖基化终末产物对软骨细胞代谢活性的影响

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研究目的:  1.掌握人胎儿及成人骨性关节炎患者软骨细胞的采集以及体外单层培养和三维培养的技术。  2.比较单层培养及三维培养的区别。  3.研究AGE-BSA对软骨细胞代谢的影响。  研究方法:  1.软骨细胞的来源:取自26周左右的引产胎儿,酒精消毒双膝关节,生理盐水冲洗后于无菌条件下切取双膝关节股骨下端及胫骨平台表面软骨,组织剪碎软骨块,采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶序贯消化法取得单个软骨细胞,先采用单层培养,然后进行三维培养。成人骨性关节炎患者软骨收集来自行膝关节表面置换患者,术中收集软骨快后采用相同方法获得单个软骨细胞进行培养。  2.实验分组:按照实验方法分为3组:牛血清白蛋白(BSA)组、AGE-BSA组、sRAGE预处理45min+AGE-BSA组。  3.相关检测指标:倒置光学显微镜观察,软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化检测,软骨细胞HE染色,甲苯胺蓝染色,RT-PCR,免疫印迹。  研究结果:  1.利用机械与酶序贯消化法成功获得大量软骨细胞,成功的进行了体外单层培养及三维培养,构建了相对稳定的软骨细胞体外三维培养体系。  2.单层培养及三维培养比较后发现,三维培养在维持软骨细胞形态方面优于单层培养。  3.AGE-BSA可以促进软骨细胞内RAGE、MMP-1的信使RNA合成,抑制其Ⅱ型胶原的合成分泌。  结论:  1.利用单层培养可快速获得大量人胎儿/成人骨性关节炎患者软骨细胞,且体外三维培养的方法可获得较大数量表型稳定的自体关节软骨细胞。  2.晚期糖基化终末产物可导致软骨细胞代谢紊乱,促进软骨细胞分解代谢,抑制其合成代谢。
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