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目的构建携带凋亡素基因重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-VP3，探讨凋亡素（Apoptin）在人大细胞肺癌NCI-H460细胞中的表达及诱导凋亡效应。方法以pcDNA3.1-VP3重组质粒为模板，经酶切将VP3基因连接至穿梭质粒，后转移至pAdxsi载体上,收获pAdxsi-GFP-VP3，经酶切和测序鉴定正确后进行病毒扩增和纯化，最后测定病毒滴度。将pAdxsi-GFP-VP3以最适感染复数转染入人大细胞肺癌NCI-H460细胞，利用RT-PCR（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）和Western Blot技术检测Apoptin在细胞中的表达情况；通过透射电子显微镜（transmission electron microscopy, TEM）观测细胞的超微结构变化；采用MTT法检测转染后细胞的增殖活性；运用流式细胞术(flowcytometry, FCM)检测转染后细胞的凋亡率及细胞周期变化。1结果成功构建重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-VP3，经酶切与测序鉴定证实连接正确，病毒滴度可达1.6×109PFU/ml。RT-PCR显示转染48h后Apoptin的mRNA表达；Western Blot证实转染72h后Apoptin蛋白获得高表达。TEM观察发现NCI-H460细胞凋亡早期染色质聚集，线粒体固缩，凋亡中晚期出现凋亡小体等超微形态学改变。MTT法检测显示转染后的NCI-H460细胞增殖活性明显降低，呈时间依赖性，与空病毒组和细胞对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。FCM法检测显示Apoptin能有效地诱导NCI-H460细胞发生凋亡，且凋亡率随时间呈逐渐上升趋势（P＜0.05）；细胞周期表现为S期的细胞比例下降，G2／M期的细胞比例增高（P＜0.05）。结论Apoptin可以有效地诱导人大细胞肺癌NCI-H460细胞发生凋亡，这为Apoptin临床应用于人非小细胞肺癌基因治疗的深入研究奠定实验基础。