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目的:探讨双糖链蛋白聚糖(biglycan,BGN)对小鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期脑损伤(early brain injury,EBI)中神经炎症的影响及机制,进而为SAH后神经损伤的治疗提供新的靶点。方法:1、探讨BGN对SAH后EBI中神经炎症的影响。(1)将C57BL/6J雄性野生型小鼠分为假手术(Sham)组、SAH6 h组、SAH 12h组、SAH24 h组、SAH 48 h组、SAH 72 h组(每组5只小鼠用于数据检测),采用改良的血管内穿刺法构建SAH模型;蛋白质免疫印迹法(western blot)检测各组BGN蛋白表达水平。(2)将C57BL/6J雄性野生型小鼠分为Sham组、Sham 空载病毒(Sham BGN-NC)组、Sham BGN慢病毒(Sham BGN-KD)组(每组3只小鼠用于数据检测),空载慢病毒及BGN慢病毒通过侧脑室注射,沉默小鼠脑组织中的BGN表达;荧光实时定量PCR法(qRT-PCR)检测各组脑组织中BGN mRNA的表达水平。(3)将C57BL/6J雄性野生型小鼠分为Sham组、SAHBGN-NC组、SAHBGN-KD组,模型构建及慢病毒注射方法同上所述;改良加西亚评分及平衡木实验评估各组小鼠的神经功能(每组6只小鼠用于数据检测);蛋白质免疫印迹法检测BGN蛋白表达水平(每组5只小鼠用于数据检测);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)三种炎症因子的表达水平(每组5只小鼠用于数据检测);脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)法检测各组小鼠神经元凋亡的情况(每组3只小鼠用于数据检测)。2、探讨BGN对SAH后EBI中神经炎症的调控机制。(1)将C57BL/6J雄性野生型小鼠分为Sham组、SAH48 h组(每组3只小鼠用于数据检测),模型构建方法同前所述;免疫荧光双标染色法(immunofluorescence double staining)检测各组脑组织中BGN在小胶质细胞中的表达情况。(2)将BV-2细胞株分为对照(CON)组、氧合血红蛋白(oxyhemoglobin,HB)组(每组3次独立重复实验用于数据检测),用HB刺激小鼠BV-2细胞(小胶质细胞株)模拟体外细胞SAH模型;免疫荧光双标染色法检测BGN与Toll样受体4(TLR4)共定位情况;免疫共沉淀法(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测BGN与TLR4相互作用情况。(3)将BV-2细胞株分为HB BGN-NC组、HB BGN-KD组(每组3次独立重复实验用于数据检测),建模方法同前所述;蛋白质免疫印迹法和荧光实时定量PCR法分别检测BGN的蛋白及mRNA表达水平。(4)将BV-2细胞株分为CON组、HB BGN-NC组、HBBGN-KD组(每组3次独立重复实验用于数据检测),建模方法同前所述;蛋白质免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平;ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子的表达水平;免疫荧光法检测CD16/32蛋白表达水平;流式细胞术检测CD86蛋白表达水平。(5)将C57BL/6J雄性野生型小鼠分为Sham组、SAHBGN-NC组、SAHBGN-KD组(每组5只小鼠用于数据检测),建模及慢病毒注射方法同前所述;蛋白质免疫印迹法检测iNOS、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达水平。结果:1、(1)SAH后EBI期间,BGN的表达升高,于48h达峰值,差异有统计学差异(P<0.05)。(2)与Sham组比较,Sham BGN-NC组小鼠脑组织中BGN mRNA的表达水平无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05);与Sham BGN-NC组比较,Sham BGN-KD组小鼠脑组织中BGN mRNA的表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)沉默BGN后,SAH 48 h小鼠的改良加西亚评分和平衡木实验评分均明显升高,BGN、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达水平均明显降低,神经元凋亡比例明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。2、(1)BGN在小胶质细胞中有表达。(2)在小胶质细胞中,BGN与TLR4之间存在相互作用。(3)HB BGN-KD组较HB BGN-NC组的BGN蛋白及mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)沉默BGN 后,经 HB 刺激 48h 的小胶质细胞 p-NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、M1型小胶质细胞marker蛋白(iNOS、CD16/32、CD86)表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(5)沉默BGN后,SAH 48 h小鼠的p-NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、M1 型小胶质细胞 marker 蛋白(iNOS)表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制BGN可减少TLR4/NF-κB通路激活所致的M1型小胶质细胞活化,进而减轻SAH后EBI的神经炎症及神经元凋亡并改善神经功能损伤。这一理论基础,为SAH后神经损伤的治疗提供了新的策略及依据。