冷冻—复苏诱导的星状胶质细胞去分化的研究

来源 :中国科学院上海脑研究所 中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:emydisk
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在中枢神经系统发育过程中,放射状胶质细胞担负着引导神经元迁移的重要作用。当神经元迁移结束后,大脑皮层区域的放射状胶质细胞分化为星状胶质细胞,失去了引导神经元迁移的功能。而在小脑区域的放射状胶质细胞则成为Bergmann胶质细胞。已有的研究表明在胚胎前脑神经元所分泌的可扩散性化学信号分子或体内冷冻损伤所产生的信号分子诱导下,成熟的星状胶质细胞可去分化为具有放射状细胞形态并表达Nestin的细胞,这种细胞被认为是放射状胶质细胞样的细胞或是星状胶质细胞和放射状胶质细胞间的过渡态细胞,推测它们可能是由成熟的星状胶质细胞发生去分化而产生的。但是,已有的实验对此都未能提供直接的证据,也未对这种放射状胶质细胞样细胞的性质进行详尽的描述。 本论文结合体外纯化培养成熟星状胶质细胞与冷冻复苏细胞的方法,在体外建立了一种诱导成熟星状胶质细胞转化为放射状胶质细胞的类似细胞的方法。该放射状胶质细胞的类似细胞具有以下主要特征:与放射状胶质细胞形态类似,具有典型的双极型、长、细、无分枝突起及末端的类终足样结构,因此我们称之为放射状胶质细胞类似细胞,简称为RGL细胞(radialglia-likecell);经免疫荧光法和免疫印迹法分析表明,RGL细胞不但表达放射状胶质细胞及神经干细胞的标记性蛋白Nestin,而且还表达星状胶质细胞标记性蛋白GFAP及Vimentin,提示RGL细胞免疫反应特性方面具有放射状胶质细胞及神经干细胞的细胞化学特性;培养于无血清培养基中的RGL细胞自身可分裂增殖,在EGF的存在下可促进其分裂增殖;RGL细胞与放射状胶质细胞一样具有引导神经元迁移的功能,经统计分析得到神经元在RGL细胞长突起上的平均迁移速度为25.75±3.22μm/hr;如不加干预,RGL细胞最终的命运是星状胶质细胞。EGF及bFGF的存在有利于维持RGL细胞的形态和功能特征,而血清和TGFβ1则促进RGL细胞的形态分化。 本论文的工作首先运用冷冻复苏这一简单可行的方法,由纯化的星状胶质细胞获得形态和功能特征都类似于放射状胶质细胞的细胞(RGL细胞),接着我们研究了RGL细胞的形态、生化、和功能特征,证实RGL细胞不但具有放射状胶质细胞的形态,还具有引导神经元迁移的功能。我们的工作为进一步研究神经胶质细胞分化机制提供了体外模型,由于放射状胶质细胞样细胞在体外可大量获得,在用神经移植治疗神经损伤及神经退行性疾病方面可能具有应用前景。此外,RGL细胞与神经元共培养也是研究神经元迁移的一个良好模型。
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