论文部分内容阅读
血清学蛋白质组技术简称SEPRA(serological proteome analysis)是近来发展起来的一种新的筛选肿瘤抗原的方法。该方法将SEREX(serological analysis of recombinant cDNA expression libraries)技术、蛋白质组学和现代质谱鉴定技术三者相结合,通过二维电泳分离肿瘤细胞蛋白,再以相应病人血清为一抗进行Western blot,以正常人血清作阴性对照,筛选病人血清特异性结合的肿瘤蛋白,最后对阳性蛋白点酶解消化后进行质谱鉴定。这种鉴定肿瘤抗原的方法同以前的方法相比,具有以下优点:1)利用抗肿瘤血清筛选的肿瘤抗原由于在体内具有免疫原性,不仅可作为制备肿瘤疫苗的靶分子,还可作为大范围人群血清学调查、肿瘤临床诊断及肿瘤疫苗临床疗效监测的对象;2)抗瘤血清有目的地筛选体内具有免疫原性的蛋白抗原,减少了所需鉴定的蛋白数量,相应地减少了工作量和实验经费,而临床应用价值可能更大;3)从蛋白质水平筛选肿瘤抗原,电泳图谱上得到的是完整蛋白,避免了cDNA文库中的基因可能不是完整基因的缺陷;4)可能有利于研究翻译后修饰对蛋白免疫原性的影响。应用这种方法已在多种肿瘤中鉴定出了肿瘤抗原和肿瘤标记物,为肿瘤的治疗、诊断、预后提供了新的依据。 本研究将SERPA技术应用到血液病肿瘤,对慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia,CML)肿瘤相关抗原进行了筛选。选择CML作为研究对象的一个主要原因在于用于白血病免疫治疗的白血病相关抗原(leukemia-associated antigens LAAs)如:Wilms’肿瘤抗原(WT-1)和蛋白水解酶3,不仅在白血病细胞上过度表达,而且在一些早期造血干细胞、正常组织中也有表达,当以这种抗原为靶标进行免疫治疗时,所诱导的细胞毒性效应同时也会针对正常的造血干细胞甚至正常组织,故这两种抗原用于白血病的免疫治疗并不理想。因此,寻求和鉴定新的肿瘤特异性LAAs对发展白血病的免疫治疗非常重要。 采用SERPA技术,我们以K562细胞提取蛋白作为抗原来源,以30例不同分期的CML病人血清为一抗,以健康人血清为对照,成功的筛选出5种LAAs,分为三类:1)与肿瘤相关的酶类:alpha enolase,aldolase A,;2)热休克蛋白:HSP70 protein8;3)细